PARTICIPACIÓN DE LAS ESPECIES REACTIVAS DEL OXÍGENO DURANTE LA MADURACIÓN Y ACTIVACIÓN IN VITRO DE OVOCITOS BOVINOS

SERGIO MORADO; GABRIEL DALVIT

Buenos Aires

Jornada; Jornadas de Investigadores Jóvenes en Ciencias Veterinarias; 2014

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires

La participación las especies reactivas del oxígeno (ROS) en los procesos reproductivos es aún controversial. En el ratón se ha determinado que las ROS tienen una importancia fundamental en el desarrollo embrionario temprano. El objetivo de este trabajo fue determinar la producción de ROS durante la maduración (IVM) y el desarrollo temprano in vitro de ovocitos bovinos activados por espermatozoides o partenogenéticamente. Los complejos ovocito-cumulus (COCs) obtenidos por aspiración de folículos antrales de ovarios de vacas de faena fueron cultivados en medio 199 durante 22 hs a 39ºC, 5% de CO2 y 95% de humedad. La fecundación in vitro se llevó a cabo con semen congelado en pajuelas y descongelado a 37 ºC en medio mSOF adicionado de teofilina 10 mmol/l, luego centrifugado y resuspendido hasta una concentración final de 2x106 espermatozoides mótiles/ml. La co-incubación de espermatozoides y COCs se realizó en mSOF adicionado de heparina 10 IU/ml y BSA 5 mg/ml a 39ºC, 5% CO2 y 100% de humedad durante 24 hs. Los ovocitos activados partenogenéticamente fueron denudados e incubados 5 minutos en TALP suplementado con 3 mg% de BSA y ionomicina 5 µM. Después de la activación fueron cultivados 3 hs en mSOF adicionado de 6-dimetilaminopurina 2 mM y citochalacina B 7,5 µg/ml y finalmente en mSOF suplementado con 10 mg/ml de BSA durante 21 hs. Los niveles de ROS se determinaron mediante 2´,7´-diclorodihidro diacetato de fluoresceína cada 2 hs durante la IVM y el desarrollo temprano de los ovocitos activados. Se detectó una diferencia significativa en los niveles de ROS a las 4 hs de IVM comparado con la hora 0 (p