Efecto del óxido nítrico en la producción de especies reactivas del oxígeno y la maduración in vitro de ovocitos bovinos

SERGIO MORADO; GABRIEL DALVIT

Buenos Aires

Jornada; Jornada de Investigadores Jóvenes; 2011

Facultad de Ciencias Veterinarias

El óxido nítrico (NO) es un radical libre endógeno que participa en la activación y maduración de los ovocitos, el desarrollo embrionario y la implantación. Concentraciones sub-micromolares de NO tienen dos efectos principales en la cadena respiratoria: (1) inhibición competitiva de la citocromo oxidasa y (2) estimulación de la producción de anión superóxido (O2-) por inhibición del transporte de electrones al complejo III. En la matriz mitocondrial el NO reacciona rápidamente con el O2- formando peroxinitrito (ONOO-). El objetivo de este trabajo fue determinar la participación del NO en la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) y la maduración de ovocitos bovinos in vitro. Los complejos ovocito-cumulus (COCs) se obtuvieron de ovarios de faena y se maduraron en medio 199 (control), adicionado con nitro-L-arginina metil éster 0,5 mM (L-NAME, inhibidor de la NO sintasa endotelial) o nitroprusiato de sodio 10 µM (SNP, donante de NO) a 39˚C, 5% CO2 por 22hs. El porcentaje de maduración nuclear se determinó por la presencia de metafase II. La producción de ROS en ovocitos denudados se cuantificó a las 0, 6, 12, 18 y 22hs por el cociente entre las técnicas de 2´,7´diclorodihidrodiacetato de fluoresceína y diacetato de fluoresceína. Los valores de ROS fluctuaron durante las 22hs de maduración, presentando un patrón similar con los diferentes tratamientos. En COCs madurados en presencia de SNP se detectó una disminución a las 6hs y un aumento a las 12hs en los niveles de ROS respecto del control (p