Expresión de cadherina epitelial durante el desarrollo de la epidermis embrionaria de pez cebra

SIGOT, VALERIA

Taller; IV Taller de Biología del Desarrollo; 2018

El remodelado dinámico de los contactos adhesivos intercelulares o unionesadherentes (UAs) mediado por la cadherina epitelial E (cadh-E) es clave paramantener la integridad de tejidos y coordinar los movimientos celulares colectivos durante la embriogénesis animal.En el pez cebra, la distribución espacio-temporal de cadh-E durante el desarrollo de la epidermis embrionaria permanece escasamente descripta.Mediante microscopía de fluorescencia y posterior de-convolución digital puedenobtenerse imágenes con una resolución espacio-temporal comparable a la demicroscopía confocal y multifotónica. Empleando inmunofluorescencia en montajecompleto, y combinando algoritmos de deconvolución y segmentación en 3D,implementamos un protocolo para el análisis cuantitativo de la expresión de cadh-E y de la morfología celular en la bicapa de epidermis entre las 24 y 72 hpf. Para cada estadio se analizaron 5 embriones, se seleccionaron volúmenes deepidermis y se analizó la bicapa de forma global o por capas para lo cual seprocesaron individualmente la capa envolvente (EVL, enveloping layer) y la capabasal (EBL, epidermal basal layer).El aumento de E-cadh durante este período se correlacionó con la aparición denuevos contactos intercelulares en la EBL y con un aumento en la densidad decélulas hexagonales en la EVL, siendo más significativo a las 48 hpf, previo a la eclosión.La técnica de procesamiento de imágenes en 3D implementada puede extenderse al estudio de bicapas celulares en otros organismos modelo como así también para estudios de microscopía in vivo en embriones transgénicos fluorescentes.