INVESTIGADORES
RUMBO Martin
congresos y reuniones científicas
Título:
Producción y caracterización de anticuerpos monoclonales anti-flagelina.
Autor/es:
HIRIART YANINA,; GONZÁLEZ MACIEL, DOLORES; SERRADELL, MARIA (1,3);; MARTIN RUMBO
Lugar:
Mar del Plata, Argentina
Reunión:
Congreso; LXI Reunión anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2009
Resumen:
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Flagelina constituye el flagelo bacteriano y es reconocido
por los receptores de inmunidad innata TLR5, Naip5 e IPAF, por lo que resulta
un candidato para ser empleado como adyuvante vacunal. Usualmente se purifica a
partir de una suspensión bacteriana densa por desprendimiento mecánico de los
flagelos y posterior recuperación por ultracentrifugación. Las preparaciones de
flagelina pueden resultar contaminadas con LPS u otros productos microbianos activadores
de otras vías de la respuesta innata.
El objetivo de este trabajo es producir y caracterizar anticuerpos
monoclonales (AcMo) anti flagelina, a fin de mejorar los sistemas de
purificación disponibles.
Se inmunizaron vía s.c. animales BALB/c con 1μg FliC
(procedente de S. thyphimurium) en
hidróxido de aluminio, en 300μl PBS(días 0 y 15). Se aplicó un boost a día 30
con 1μg FliC en 300μl PBS. Al día 33: se realizó la fusión. Se obtuvieron 4
hibridomas en distintas fusiones que fueron subclonados, producidos en cantidad
y purificados en columna de proteína A. Los AcMo 2D11A1 son isotipo IgG2a
mientras que 2B3H10, 4C1H7 y 5B4H2 resultaron isotipo IgG1. No se observó
reactividad por ELISA contra flagelinas de otras especies microbianas distintas
a la de S. typhimurium. En ELISA
contra FliCΔ3, una variante carente del dominio antigénico, 2B3H10 y 4C1H7 resultaron
positivos. Se evaluó la capacidad de bloqueo de actividad biológica de FliC sobre
células caco-ccl20-luciferasa. 2B3H10 y 4C1H7 bloquearon el efecto de
flagelina, aunque 4C1H7 lo hizo concentraciones mayores, indicando diferencias
en la interacción. Empleando los AcMo biotinilados en
ELISA de competición, no se observó desplazamiento entre los distintos AcMo
obtenidos por lo que podría descartarse el reconocimiento de epitopes solapados.
En conclusión, se obtuvieron y caracterizaron 4 monoclonales anti-FliC de
especificidad adecuada para ser utilizados en cromatografía de afinidad a fín
de mejorar las preparaciones de flagelina obtenidas en nuestro laboratorio