DETERMINACIÓN DE LA CAPACIDAD ADYUVANTE DE AGONISTAS TLR EN UN MODELO DE Inmunización intranasal FRENTE A BORDETELLA PERTUSSIS

ERREA AGUSTINA; ROBERTS, ROY; BOTTERO, D; DANIELA HOZBOR; MARTIN RUMBO

La Falda

Congreso; LX reunión anual de la Sociedad Argentina de Inmunología. La Falda, noviembre de 2008; 2008

Sociedad Argentina de Inmunologia

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:10.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES-TRAD; mso-fareast-language:FR;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> <!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Bordetella pertussis es un patógeno de vías respiratorias cuya incidencia, aún en poblaciones con alta tasa de vacunación, se ha incrementado en los últimos años. La inmunización intranasal (i.n.) es una alternativa para lograr buena inmunidad en vías respiratorias dado que se asemeja al evento natural de infección. Las formulaciones para administración i.n. deben garantizar una respuesta protectora minimizando sus efectos tóxicos. Objetivos: evaluar la capacidad estimulatoria de distintos agonistas TLR (flagelina y poliI:C) sobre macrófagos alveolares y su capacidad de inducir una respuesta protectora en un modelo de vacunación de B. pertussis. Metodología: Administración i.n. de los agonistas y análisis de expresión de genes por RT-qPCR. Ensayo de inmunización y desafío i.n. con B. pertussis. Como antígeno vacunal se emplearon vesículas de membrana externa de B.pertussis tratadas exhaustivamente con deoxicolato para eliminar el LPS residual (OMV-L). Este antígeno no presenta toxicidad, pero no confiere protección al ser administrado i.n. Se inmunizaron i.n. animales BALB/C a día 0 y 14 con 5 ug de OMV-L. Los distintos grupos fueron: PBS; OMV-L;  CpG 20 μg/dosis + OMV-L; CpG control 20 μgU/dosis + OMV-L; FliC 500ng/dosis + OMV-L ; poli I:C 50μg/dosis + OMV-L. Al día 24 post inmunización se realizó el desafío con B. pertussis  (4x107 UFC/50 µl). La protección se evaluó por recuento de la colonización bacteriana en pulmón total al día 5 postdesafío.  Resultados: Tanto flagelina (1ug/mL) como poli I:C (1ug/mL) mostraron capacidad para activar marcadores de respuesta innata en macrófagos alveolares. Poli I:C mostró un incremento relativo de la expresión de IFNβ 3.59±0.14 siendo no significativa su capacidad de inducción de CXCL2 y TNFa. Flagelina por su parte indujo  un incremento relativo de la expresión de TNFα, 4.76±0.12 FI y CXCL2, 3.19±0.40. El ensayo de protección mostró una disminución en los niveles de colonización respecto del grupo control en todos los tratamientos que incluían agonistas TLR, siendo estadísticamente significativa en el caso de Poly IC vs PBS (3,78  ±0,83 vs 6,00 ±0,03 log10ufc/ pulmón ) y de CpG vs PBS (5,02 ±0,37 vs  6,00 ±0,03 log10ufc/ pulmón). En todos los casos los tratamientos resultaron no tóxicos en el test de ganancia de peso, de acuerdo a los parámetros establecidos por la OMS. Conclusión: el empleo de agonistas TLR es una alternativa para mejorar la capacidad protectora de formulaciones acelulares frente a B. pertussis, constituyendo una posibilidad para el desarrollo de esquemas de inmunización intranasal frente a este patógeno.