Efecto colateral de la replicación activa del HIV en astrocitos

SÁNCHEZ L.; URQUIZA, J. M.; CEVALLOS C.; QUARLERI, JORGE F.; OJEDA D.

Jornada; XXXVIII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE VIROLOGÍA; 2018

El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) es capaz de infectar el parénquima cerebral, causando desórdenes neurológicos asociados a inflamación en el sistema nervioso central (SNC), que persiste a pesar del tratamiento antirretroviral combinado. Los astrocitos, el tipo celular más abundante en el SNC juegan un rol protagónico en la neuropatogénesis promoviendo el daño neuronal durante las infecciones virales del SNC. Los mecanimos involucrados en la patogénesis astrocitaria permanecen oscuros.Para las infecciones de los astrocitos humanos (NHA) en cultivo se usó HIV pseudotipado expresando las proteínas del virus salvaje, la proteína fluorescente verde (GFP) y la glicoproteína G del virus de la estomatitis vesicular (pNL43-eGFP-VSV-G). La infección se monitoreó mediante citometría de flujo (FACS) diferenciando en cada cultivo células productivamente infectadas (PI/GFP+) de aquellas que no lo estaban (NPI/GFP-). La evaluación del daño celular bystander implicó ensayos de cocultivo en los que se distinguieron poblaciones por FACS utilizando un colorante vital (VCP). Paralelamente se evaluó el potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) y muerte celular (AnexinaV/7AAD). Para evaluar piroptosis celular, se separaron mediante FACS las poblaciones celulares de cada cultivo según su estado de infección. En cada una se evaluó la expresión de caspasa-1, GSDMD y NLRP3 por WB. Para conocer los estímulos virales asociados a la activación de la piroptosis, se emplearon drogas antivirales (AZT, nevirapina, raltegravir e indinavir) que inhiben enzimas virales involucradas en la replicación. Las células NPI (pero no las PI) exhibieron significativo disipación del ΔΨm asociado y aumento en la muerte celular (p