Detección de vitelogenina de Caiman latirostris (yacaré overo) como biomarcador de contaminación ambiental por xenoestrógenos

REY F, RAMOS JG, STOKER C, BUSSMANN LE, LUQUE EH, MUÑOZ DE TORO M

Mar del Plata

Congreso; XLIX Reunión Anual de la SAIC (Sociedad Argentina de Investigación Clínica); 2004

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

En nuestro país los ecosistemas hídricos están amenazados por contaminantes agroindustriales con actividad hormonal. La selección de especies centinelas y de biomarcadores es crítica para el diseño de estrategias de evaluación de contaminación ambiental. La vitelogenina (Vtg) es una proteína producida en hígado de especies ovíparas en respuesta a estrógenos. Nuestro objetivo fue desarrollar un ELISA para detectar Vtg de yacarés y validar su uso como biomarcador de contaminación ambiental por xenoestrógenos. Para obtener Vtg plasmática se inyectaron hembras juveniles con una dosis diaria (1mg/kg) de 17b estradiol (E2) durante 7 días. La Vtg se purificó por precipitación con EDTA-MgCl2 seguida de cromatografía de intercambio iónico. Con la Vtg purificada se generaron anticuerpos en conejos. El antisuero se purificó por doble cromatografía de afinidad: unión a proteína A, seguida de unión a matrices ligadas con Vtg. Se diseñó un ELISA de competición por captura de anticuerpo ligando Vtg a fase sólida. El límite de detección del ELISA fue 1 ng/ml, la sensibilidad -0.202 ml/μg y el rango de linealidad de 6 a 1563 ng/ml. La concentración de Vtg en plasma de hembras tratadas con una dosis alta de E2 (7 días con 1mg/kg/día) fue 25.6 mg/ml. La administración a yacarés machos de bajas dosis de E2, una única dosis de 1mg/kg o dos dosis separadas 7 días, indujeron 0.38 mg/ml y 4.65 mg/ml de Vtg en plasma, respectivamente. En machos y hembras juveniles, los niveles basales de Vtg fueron no detectables. El efecto de priming observado en machos demuestra la alta sensibilidad del yacaré a bajas concentraciones de xenoestrógenos. El ELISA desarrollado permitirá monitorear la exposición de poblaciones silvestres de yacaré a estrógenos ambientales y utilizar a esta especie como centinela