DISEÑO Y SINTESIS DE LIGANDOS FLUORESCENTES PARA LA DETECCION DE PROTEINAS BLANCO

LUCIANA GIORDANO; NICOLÁS ARRUPE; ANA BELLOMO

Potrero de los Funes- San Luis

Simposio; XXI Simposio Nacional de Química Orgánica; 2017

Sociedad Argentina de Investigaciones en Química Orgánica (SAIQO)

El screening es una herramienta fundamental para encontrar moléculas prometedoras dentro de un gran número de compuestos con capacidad de modular la actividad biológica de blancos terapéuticos pudiendo ser potenciales fármacos1. Los ensayos usados para realizar esta selección deben ser reproducibles, robustos y confiables. Las técnicas basadas en fluorescencia son simples, económicas sensibles y ampliamente usadas en screening. El sitio activo de proteínas/enzimas es utilizado como blanco para diseñar ligandos/inhibidores selectivos. La interacción proteína-ligando puede ser aprovechada para desarrollar sistemas selectivos de detección o imágenes. El desafío consiste en como traducir el reconocimiento ligando/proteína en una señal detectable e interpretable. El encendido de la fluorescencia puede llevarse a cabo luego de acoplar una sonda fluorescente a un ligando activo que se une al domino de la proteína blanco2. Muchas sondas de este tipo son diseñadas para monitorear actividades enzimáticasen donde la sonda es activada por una reacción enzimática. Es así que el diseño de sondas que se encienden en proteínas no enzimáticas es novedoso y deseable. La sonda fluorescente puede ser sintetizada por conjugación del fluoróforo con un ligando específico de la proteína blanco. Nosotros nos focalizamos en dos conceptos representativos de detección: (i) sondas sensibles al entorno que exhiben una fluorescencia muy débil en un medio polar y/o prótico, pero una fluorescencia fuerte en un medio hidrofóbico, 3-hidroxicromonas3 y (ii) Sondas de rotores moleculares, en donde bajo irradiación se produce una transferencia de carga intramolecular mediante una vía de relajación torsional no radiativa, siendo así sensibles a cambios en la viscosidad del medio, BODIPY4.Nuestro sistema modelo consiste en conjugar el fluoróforo sintetizado a bencenosulfonamida, un ligando de la Anhidrasa Carbónica II (hCAII). Mediante las sondas generadas se evaluará la afinidad a la proteína blanco y el método espectroscópico de detección.