Evaluación preliminar de la diversidad bacteriana de muestras de sedimento superficial del Muelle A. Storni, Puerto Madryn

RIVA MERCADAL, J. P.; CRISTINA ESTEVEZ; FERRERO, M.; HEBE M. DIONISI

La Plata, Buenos Aires

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Microbiología General; 2005

Sociedad Argentina de Microbiología General

Por décadas, el estudio de los ecosistemas microbianos se ha visto limitado por la imposibilidad de cultivar la mayoría de los microorganismos presentes en el medio ambiente. Sin embargo, avances recientes en técnicas de biología molecular permiten realizar estudios que hasta hace poco tiempo resultaban imposibles. Los sedimentos funcionan como un lugar de almacenamiento de sustancias contaminantes hidrofóbicas y, debido a su resuspensión, representan una fuente latente de contaminación de zonas aledañas; siendo paradójicamente un importante reservorio de microorganismos con potencial uso en biorremediación. En este trabajo se realizaron estudios sobre la diversidad bacteriana presente en los sedimentos marinos de la capa superficial (0-3 cm) de la playa del Muelle Almirante Storni de la ciudad de Puerto Madryn, una zona altamente contaminada por su cercanía a zonas industriales y al puerto. Estos sedimentos fueron utilizados como inóculo para el desarrollo de bacterias heterótrofas cultivables en medio líquido con agitación a 25, 15 y 8 ºC. En todos los casos, el crecimiento bacteriano se llevó a cabo utilizando 2 medios de cultivo complejos diferentes. El primero consistió en una modificación del medio ampliamente utilizado en muestras ambientales, R2A, al que se le adicionó 3% de NaCl y cuyo pH se ajustó en 7.6 con NaOH.  El otro medio utilizado consistió en un medio marino sintético con un suplemento de YPD al 10% (Medio Marino JP). Los recuentos para determinar UFC/g de sedimento se realizaron en placas con ambos medios a los que se adicionó 1,5% de agar. Las mismas fueron incubadas a 25, 20 y 4 ºC. En general se encontraron entre 2 y 7,5 x105 UFC / gramo de sedimento. Al comparar los resultados obtenidos entre ambos medios, se halló que en el Medio Marino JP hubo un mayor número de UFC/ g excepto para las placas a 4 ºC en donde no hubo diferencias significativas, mientras que al comparar las distintas temperaturas de incubación para un mismo medio se encontró que en el medio R2A modificado a 4 y 25 ºC crecieron aproximadamente 50 y 100% más de colonias que a 20 ºC, respectivamente. En cambio, en el otro medio utilizado a 25 y 20 ºC se hallaron casi 3 veces más UFC/ g que a 4 ºC. El DNA total de bacterias presentes en el sedimento,  el de las bacterias desarrolladas en los cultivos líquidos y el de las colonias obtenidas en las diferentes condiciones de cultivo (previamente cosechadas con buffer TE estéril) fue extraído utilizando la técnica del CTAB. Para abordar el estudio de la biodiversidad microbiana obtenida en los distintos ensayos y por extracción directa de DNA de los sedimentos, se utilizó una combinación de PCR y electroforesis o separación de fragmentos de DNA amplificados por PCR en geles de poliacrilamida (PA) con gradiente lineal desnaturalizante (DGGE). La técnica fue introducida en el campo de la ecología microbiana molecular para analizar la diversidad genética de poblaciones bacterianas.