Purificación y caracterización de cinco actinoporinas producidas por la anémona marina Actinia Fragaceae

BELLOMIO A; MORANTE K; VIGUERA AR; GONZALEZ-MAÑAS JM

Bilbao, España

Congreso; XXXI Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular; 2008

Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular

                   Las anémonas marinas se alimentan de pequeños crustáceos y peces, a los que dan caza mediante el uso de toxinas citolíticas, que reciben el nombre genérico de actinoporinas. Las actinoporinas más estudiadas son la equinatoxina-II, la esticolisina y la magnificalisina, producidas por Actinia equina, Stichodactyla helianthus y Heteractis magnifica, respectivamente. Su efecto más importante sobre células es la formación de poros en las membranas plasmáticas.                    En este trabajo reportamos la purificación a homogeneidad desde el líquido exudado por A. fragaceae de 5 nuevas actinoporinas denominadas fragaceatoxinas, mediante cromatografía de intercambio catiónico. La concentración hemolítica 50% de la más activa es menor a 0,5 nM, en tanto la de menor actividad es  3 nM. Las  masas moleculares se determinaron por ESI-MS y oscilan entre 19672 y 19777 Da. Con las secuencias de aminoácidos del N-terminal se diseñaron oligonucleótidos específicos que se usaron con un oligonucleótido de poli-dT para llevar a cabo reacciones de retrotranscripción seguidas de PCR en un solo paso a partir de ARN aislado de un ejemplar de A. fragaceae. Los cDNAs obtenidos de un tamaño aproximado a 750 pb se clonaron en un vector para clonación de productos de PCR y se secuenciaron. La estructura primaria de 4 fragaceatoxinas se dedujo a partir de la secuencia de ADN de sus genes y todas resultaron homólogas a las actinoporinas ya conocidas. Con estos resultados concluimos que en A. fragaceae las actinoporinas expresadas, al igual que en A. equina y S. helianthus están codificadas por una familia de genes.