Detección de los herpesvirus bovino tipo 1 (BoHV-1) y 5 (BoHV-5) en el sistema nervioso central del bovino.

RENSETTI, D; MARIN, M; MORÁN, P; VERNA, A; ODEÓN, A; PEREZ, S. E

Tucumán

Jornada; XX Reunión científico-técnica de la Asociación Argentina de Laboratorios de Diagnóstico; 2014

AALDV

Introducción El herpesvirus bovino tipo 1(BoHV-1) es un alfa-herpesvirus responsable de diversos síndromes en el ganado, incluyendo enfermedad respiratoria, abortos y trastornos reproductivos. El herpesvirus bovino tipo 5 (BoHV-5), un alfa-herpesvirus estrechamente relacionado y previamente clasificado como BoHV-1.3, es el agente causal de meningoencefalitis necrotizante no supurativa en terneros, una condición altamente prevalente en América del Sur.  A diferencia del BoHV-5, el BoHV-1 sólo se reportaba esporádicamente como responsabe de encefalitis en bovinos. Sin embargo,  trabajos recientes identificaron a este virus como una causa frecuente de encefalitis en el ganado y demostraron que la participación del BoHV-1 en la enfermedad neurológica no es un evento raro. El propósito de este estudio fue determinar y comparar la presencia y la distribución de ambos alfa-herpesvirus en el sistema nervioso central (SNC) de bovinos inoculados experimentalmente. Materiales y métodos. En este estudio se utilizaron 14 terneros de 1 año de edad. Todos los animales eran seronegativos a BoHV-1 y BoHV-5. Los terneros fueron inoculados intranasalmente mediante aerosolización con 10 ml de la cepa Cooper de BoHV-1 o de la cepa 97-613 de BoHV-5. Los animales se agruparon al azar de la siguiente manera: Grupo 1 (n = 4) destinado al estudio de infección primaria (aguda), Grupo 2 (n = 4) al estudio de latencia, Grupo 3 (n = 4) al estudio de reactivación de la latencia y el Grupo 4 fue el grupo control (n = 2). Los terneros en el Grupo 1 fueron inoculados con 106.3 dosis infectivas en cultivo celular 50(DICC50) de las cepas Cooper (2 terneros) o 97-613 (2 terneros) para inducir la infección primaria aguda. La eutanasia se realizó al los 6 días post-inoculación (dpi). Los terneros en el Grupo 2 fueron inoculados con 103 DICC50 de las cepas Cooper o 97-613 para inducir la infección latente. Los terneros en el Grupo 3 recibieron el mismo inóculo que los del Grupo 2. A los 21 dpi estos terneros recibieron un tratamiento con dexametasona (DEX) para inducir la reactivación viral. La eutanasia se realizó a los 25 dpi. Los terneros no infectados se inocularon con medio de cultivo. La eutanasia de un animal se realizó a los 6 dpi y la del otro ternero a los 2 días post-reactivación. A la necropsia se colectaron muestras de cerebro para aislamiento viral y PCR. Se evaluaron las siguientes áreas: corteza anterior, incluyendo corteza olfatoria (muestra 1), corteza frontal (muestras 2 y 3) y corteza dorso-lateral (muestra 4); corteza posterior, incluyendo el área del surco marginal (muestra 5) y ectomarginal (muestra 6); cerebelo (muestra 7); médula cervical (muestra 8); médula oblonga (muestra 9), puente (muestra 10) y diencéfalo (muestra 11). Además, se tomaron muestras de ganglio trigémino (GT). El aislamiento viral se realizó sobre células MDBK. Las técnicas de nested PCR descriptas por  Wang et al. (2001) (gD BoHV-1) y Mayer et al. (2006) (gB BoHV-5) se usaron para la detección de ADN viral en tejido nervioso. Resultados y Discusión. Durante la infección aguda (6 dpi) se aisló BoHV-1 en tejido nervioso de ambos terneros inoculados. Los títulos virales más elevados se detectaron en la corteza olfatoria, surco ectomarginal de la corteza posterior, puente y diencéfalo. En el caso de los terneros inoculados con BoHV-5 no fue posible aislar el virus de ninguna muestra de tejido nervioso. Sólo se detectó virus infeccioso en el GT de uno de los terneros inoculados. Como era esperado, el BoHV-1 o el BoHV-5 no se aislaron de las muestras de los terneros latentemente infectados ni de los terneros sin infectar. El BoHV-1 no se aisló de los tejidos de los animales que recibieron DEX. Sin embargo, el BoHV-5 se aisló a partir de corteza frontal, dorso-lateral y posterior luego de inducida la reactivación. El título viral más elevado se detectó en corteza frontal. El ADN de BoHV-1 y BoHV-5 se detectó consistentemente en varias áreas del SNC, incluyendo médula cervical y médula oblonga de los terneros infectados en forma aguda. A diferencia del BoHV-1, el ADN de BoHV-5 se detectó en varias regiones del cerebro y en el GT de terneros latentemente infectados y de terneros que recibieron DEX. Los resultados de este estudio demuestran que el BoHV-1 es capaz de replicarse en forma aguda en el cerebro bovino y que el aislamiento de virus a partir de este tejido resulta más fácil que el aislamiento de BoHV-5. La dificultad en el aislamiento de BoHV-5 en tejido nervioso se reportó previamente (Belknap et al., 1994, Pérez et al., 2002). A pesar de la factibilidad de aislar BoHV-1 de tejido nervioso, es interesante destacar que la encefalitis por BoHV-1 no es tan frecuentemente reportada como la causada por BoHV-5. Durante la latencia y la reactivación, la distribución del ADN de BoHV-5 en el tejido nervioso fue más amplia que la del BoHV-1 y es consistente con la reactivación clínica leve que puede observarse en el ganado en este estadio de la infección con BoHV-5. Además, los resultados de este estudio enfatizan la importancia de usar técnicas moleculares para el diagnóstico de la encefalitis por herpesvirus en el ganado. Referencias. 1.Belknap et al. 1994. Experimental infection of neonatal calves with neurovirulent bovine herpesvirus type 1.3. Vet Pathol. 31, 358?365. 2. Campos F. et al., 2009. Vet Microbiol. 139: 67-73. 3.Pérez, S., Bretschneider, G., Leunda, M. et al., 2002. Primary infection, latency and reactivation of Bovine Herpesvirus Type 5 (BVH-5) in the bovine nervous system. Vet Pathol 39, 437?444. 4.Wang P. et al., 2001. Detection of bovine herpesvirus-1 in peripheral blood mononuclear cells eight months postinfection. J Vet Diagn Invest, 13, 424-427.