IBBM   21076
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA Y BIOLOGIA MOLECULAR
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Identificación de una región del genoma del baculovirus SfMNPV requerida para activar la maquinaria transcripcional tardía reproducida en base al modelo AcMNPV
Autor/es:
BERRETTA, M.F.; JARAMILLO ORTIZ, J.; SCIOCCO-CAP, A. & ROMANOWSKI, V.
Lugar:
Huerta Grande, Córdoba, Argentina
Reunión:
Congreso; XXIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología (Asociación Argentina de Microbiología)
Resumen:
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Los
baculovirus son específicos de artrópodos, especialmente de insectos del orden
Lepidoptera. Producen una infección letal en sus hospedantes susceptibles y se
utilizan como insecticidas biológicos para el control de plagas agrícolas y
forestales. Constituyen una alternativa no contaminante para
reemplazar o limitar el uso de insecticidas químicos debido a su alta
virulencia, especificidad y factibilidad de producción a escala económica. En
nuestro país varias especies se encuentran en distintas etapas de desarrollo
como insecticidas, entre ellas el nucleopoliedrovirus (NPV) de Spodoptera frugiperda (SfMNPV), que
presenta potencial para el control de la plaga homónima.
La familia Baculoviridae
es muy diversa; dentro del género NPV de lepidópteros se reconocen dos grupos
filogenéticos: NPV I, y NPV II. Al primero de estos grupos pertenece la especie
tipo Autographa californica NPV
(AcMNPV). AcMNPV causa una infección productiva en células de Spodoptera frugiperda (células SF);
la misma se caracteriza por la sucesión temporal de tres fases de expresión
génica: temprana, tardía y muy tardía. La transcripción de genes tardíos
depende de al menos 19 genes o lefs
(late expression factors)
identificados en ensayos de expresión transitoria. Se ha comprobado que algunos
lefs participan en la
determinación del rango de hospedante in
vitro, por lo cual se los considera genes candidato para modular dicha
característica en los aislamientos naturales, por medio de modificación
genética. SfMNPV pertenece al grupo NPV II; en los miembros de este grupo
algunos lefs de AcMNPV no están
conservados, por lo cual, otros genes aún no identificados podrían reemplazar
su función. En el presente trabajo utilizamos a SfMNPV como modelo para el
análisis funcional del conjunto de lefs
conservados evolutivamente en el grupo NPV II, para posteriormente evaluar su
potencial participación en la determinación del rango de hospedante. Para ello
hemos adaptado el sistema de expresión transitoria desarrollado para la
identificación de lefs en
AcMNPV. El mismo consiste en la cotransfección de céluas SF con a) el gen
indicador CAT clonado en vector plasmídico bajo control del promotor tardío del
gen de la proteína mayoritaria de la cápside, vp39, y b) todos los lefs
clonados individualmente (genoteca de lefs)
o como parte de fragmentos genómicos. Para construir la genoteca de lefs de SfMNPV, cada lef fue clonado individualmente en un
plásmido bajo el promotor hsp70 de Drosophila.
La genoteca de lefs de SfMNPV no resultó funcional
para transactivar el promotor tardío, en este sistema. Sin embargo, se obtuvo
transactivación del promotor cuando la genoteca de lefs se cotransfectó junto con cada uno de dos fragmentos
genómicos. Dichos fragmentos representan en total el 15% del genoma viral
aproximadamente y comparten un único ORF completo en la región de solapamiento
de sus respectivos extremos.
Conclusión: Se identificó una región del genoma de SfMNPV
conteniendo al menos un ORF cuyo producto aporta funcionalidad al conjunto de lefs de SfMNPV conocidos por
identidad de secuencia con los lefs
de AcMNPV.