Actividad de succinato deshidrogenasa en complejos ovocito-cumulus porcinos

CETICA PD; GUTNISKY C; BREININGER E; MARTINEZ S

Congreso; VIII Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2018

Durante el proceso de maduración in vitro del complejo ovocito-cumulus (COC) la glucosa es la principal fuente de energía, la misma es oxidada por las células del cumulus dando como producto piruvato y/o lactato que son utilizados por el ovocito como sustratos energéticos. En esta situación la enzima succinato deshidrogenasa (SDH) toma un papel preponderante ya que forma parte tanto del Ciclo de Krebs como de la cadena respiratoria mitocondrial. El objetivo de este trabajo fue determinar la actividad de la enzima SDH en COCs porcinos inmaduros y madurados in vitro. Los complejos ovocito-cumulus se obtuvieron por punción aspiración de folículos antrales de ovarios provenientes de cerdas de faena. Se seleccionaron bajo lupa estereoscópica aquellos COCs con cumulus denso y compacto. Los mismos fueron madurados en medio 199 suplementado con 10% de fluido folicular porcino (FPP), 0,2 g/ml de FSH y 2 g/ml de LH, y 50 µg/ml de sulfato de gentamicina, bajo aceite mineral a 39ºC, 5% CO2 en aire humidificado durante 48 hs. Para extraer la enzima se suspendieron los COCs en solución buffer pH 7,2 y se los congeló/descongeló, se centrifugó a 2500 rpm durante 10 minutos a 4°C, se obtuvo el sobrenadante y nuevamente se congeló/descongeló. Se centrifugó por segunda vez a 10000 rpm durante 20 minutos a 4°C, se obtuvo el precipitado y se lo resuspendió en solución buffer. Se utilizaron suspensiones de 100 COCs. La determinación de la actividad de la SDH se realizó mediante un método espectrofotométrico basado en la disminución de la absorbancia del DCPIP (2,6-diclorofenolindofenol) que actúa como aceptor de electrones. Los datos se compararon mediante la prueba estadística de T-Student (n=5). Se observó un aumento significativo en la actividad de la SDH en los COCs madurados in vitro vs inmaduros (2,37x10-05 ± 0,89x10-5 vs 3,48x10-06 ± 0,8x10-06 UE/COC). De los resultados obtenidos se puede concluir que durante la maduración in vitro de los COCs porcinos la actividad de la enzima SDH aumenta considerablemente, probablemente como consecuencia de los cambios metabólicos que suceden durante este proceso.