DNAZIMA 10-23 MODIFICADA EN EL NÚCLEO CATALÍTICO CON 2’-C-METIL-2’DESOXIURIDINA Y TIMIDÍN-LNA NUCLEÓTIDOS.

LAURA ROBALDO, JAVIER M. MONTSERRAT, ADOLFO M. IRIBARREN

Mendoza

Simposio; XVII Simposio Nacional de Química Orgánica; 2009

SAIQO

Hasta el presente, la conformación activa, el mecanismo de corte y la estructura del complejo sustrato:desoxirribozima 10-23 son desconocidos.  Aunque se han realizado muchos esfuerzos para establecer el papel de cada nucleótido en el núcleo catalítico, los potenciales requerimientos conformacionales de los restos ribosídicos no han sido investigados. Por otro lado, hay desoxirribozimas modificadas que han sido diseñadas para mejorar la reacción de corte del sustrato y para aumentar la estabilidad molecular debida a la degradación por nucleasas.        Los 2’-C-metil-2’-desoxinucleósidos adoptan una conformación preferencial del anillo ribosídico que depende de la configuración absoluta del átomo de carbono de la posición 2’-. Los (2’S)-2’-C-metil-2’-desoxinucleósidos adoptan mayoritariamente conformaciones C3’-endo mientras que aquellos que tienen configuración (2’R) adoptan una conformación preferentemente C2’-endo. Además, estos nucleótidos confieren resistencia a la degradación por nucleasas cuando son introducidos en secuencias oligonucleotídicas.        En este trabajo se presentan los resultados de la modificación de las posiciones de timidina en el núcleo catalítico de la DNAzima 10-23 tanto por (2’S) como por (2’R)-2’-C-metil-2’-desoxiuridina. Se evaluó la actiividad cinética, la resistencia a nucleasas y la dependencia de la concentración de Mg2+ para moléculas con mutaciones puntuales y dobles en el núcleo catalítico (Figura). Finalmente, se compararon las actividades de las DNAzimas 2’-C-metil modificadas con análogos sustituídos por LNA-nucleótidos en las mismas posiciones.