Modificación de la respuesta a la terapia fotodinámica por ácido 5-amino levulínico (ALA-TFD) por sulfuro de hidrógeno (H2S).

CASAS A; VALLECORSA, P; SAENZ D; CERVINI BOHM G; CALVO G; ORLANDO, C; DI VENOSA, G

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; XXXII Jornadas de Oncología, Instituto de Oncología Ángel H. Roffo, Inmunología: Avances diagnósticos y terapéuticas.; 2017

Instituto de Oncología ?Angel H. Roffo?

Objetivos: El objetivo de este trabajo es estudiarel efecto del H2S en el tratamiento con ALA-TFD.La terapia fotodinámica (TFD) es un tratamiento contra el cáncer, quecombina un fotosensibilizador (FS) y la luz. Cuando la luz llega al PS, este seexcita, y desencadena la generación de especies de oxígeno reactivo (ROS), matandoa las células. Nuestro grupo se ha centrado en el estudio del Pro-FS, el ácido5-aminolevulínico (ALA), que conduce a la síntesis del FS Protoporfirina IX(PpIX). La PpIX se acumula preferentemente en las células cancerosas, y es laque ejerce el efecto citotóxico. El sulfuro de hidrógeno (H2S) es una moléculaque pertenece a la familia de los transmisores gaseosos, junto con el óxidonítrico y el monóxido de carbono.  El H2Ses producido endógenamente y está involucrado en una variedad de procesos fisiológicosy patológicos.Materiales y Métodos: La líneacelular LM2 (tumor mamario murino, Instituto Roffo, Argentina) se trató conALA-TFD y se adicionó H2S en diferentes tiempos del tratamiento (24 h antes dela irradiación, co-incubado con ALA 1 mM, durante la irradiación, post-TFD, yla combinación de las tres condiciones).Los niveles de PpIX sintetizados se determino por espectrofluorometría. Losniveles  de GSH y las actividadesenzimáticas se determinaron por espectrofotometría.Resultados: La línea celular LM2 (tumor mamariomurino, Instituto Roffo, Argentina) se trató con ALA-TFD y se adicionó H2S endiferentes tiempos del tratamiento (24 h antes de la irradiación, co-incubadocon ALA 1 mM, durante la irradiación, post-TFD, y la combinación de las trescondiciones).Sin H2S, la dosis de luz letal 50 (LD50) fue 114 mJ/cm2; con H2Sdurante la irradiación, DL50 fue de 116 mJ/cm2; con H2S post TFD, LD50 fue de152 mJ/cm2; con H2S coincubado con ALA, DL50 fue de 304 mJ/cm2 y con H2S encada punto de TFD, la DL50 no se logró ni siquiera con la dosis más altautilizada.Estos resultados muestran que el H2S indujo una disminución de lasensibilidad de las células a la TFD. La PpIX se extrajo de las células después de la incubación con ALA o ALA +H2S, y después se determino espectrofluorométricamente. En todas laslíneas celulares, la síntesis de PpIX fue inhibida por H2S 10 mM enun 53%.Se determinaron los niveles de glutatión reducido (GSH), en células LM2después de la exposición a H2S 10 mM (24 y 2 h antes de la determinación) y seobservó un ligero pero significativo aumento en los niveles de GSH en célulasque han estado expuestas a H2S (control: 73 y tratamiento: 84 nmoles/106células).También se determinó el efecto directo del H2S como scavenger deROS y se encontró que los niveles de ROS disminuyeron cuando la concentraciónde H2S se incrementó.Se determinó la actividad de 2 enzimas implicadas en la biosíntesis dePpIX, ALA-deshidrasa (ALA-D) y porfobilinógeno deaminasa (PBG-D), eneritrocitos de sangre fresca, después de la incubación con diferentesconcentraciones de H2S. La actividad de ALA-D disminuyó 38% con laconcentración de H2S más baja utilizada (10 uM) y la de  PBG-D disminuyó 10% a partir de  100 uM de H2S.Conclusiones: Nuestros resultados sugieren que el H2Sproduce un efecto protector sobre el tratamiento TFD y puede deberse amúltiples factores: el aumento del estado antioxidante  celular, la eliminación directa de ROS y ladisminución de la síntesis de PpIX. Estos resultados deben tenerse en cuenta yaque varios tejidos producen altos niveles de H2S y podrían tener unarespuesta diferencial a la TFD y, además, estos hallazgos ayudarían a mejorarla eficiencia de la TFD.