RESPUESTA INMUNE HUMORAL EN TERNERAS PREPÚBERES INMUNIZADAS CON LA CEPA LOCAL NC- Argentina LP1 DE NEOSPORA CANINUM

Y HECKER; F FIORANI; I GUAL; MR LEUNDA; S PEREYRA; M MAZZANTI; L OLMOS; I LLADA; J MIGLIAVACCA; E LOUGE; LM CAMPERO; P ZAMORANO; G CANTÓN; A ODEÓN; DP MOORE

Encuentro; XXI Reunión Científico Técnica de la AAVLD; 2016

Neospora caninum es protozoo intracelular obligado causante de la neosporosis bovina, enfermedad que provoca abortos y genera graves pérdidas económicas en la industria ganadera mundial. Estas mermas justifican la necesidad de avanzar en la comprensión de los mecanismos de infección y patogenia así como también en la caracterización de los mecanismos inmunes que brindan protección contra la enfermedad. Aunque se han realizado numerosas investigaciones en el desarrollo de inmunógenos para el control de la enfermedad, en la actualidad no existen inmunógenos comerciales ni experimentales capaces de evitar la infección en bovinos. Ha sido reportado que aquellos aislamientos de N. caninum obtenidos a partir de terneros asintomáticos congénitamente infectados podrían estar atenuados naturalmente en su virulencia y serían posibles candidatos vacunales (Regidor-Cerrillo et al. 2008). En este sentido son varios los interrogantes que se plantean aún. Uno de ellos es si la utilización como inmunógeno vacunal de una cepa viva de N. caninum, aislada de terneros congénitamente infectados asintomáticos, en terneras prepúberes genera respuesta inmune sin provocar infección crónica en el animal. El objetivo de este trabajo fue evaluar la respuesta inmune humoral en terneras prepúberes inoculadas con la cepa local de N. caninum NC-Argentina LP1, aislada a partir de terneros asintomáticos congénitamente infectados.Se utilizaron 48 terneras raza Aberdeen Angus seronegativas a N. caninum de entre 6 y 8 meses de edad libres de otras enfermedades reproductivas. Las hembras fueron asignadas al azar en 2 grupos con los siguientes tratamientos: Grupo A (n = 24): animales inmunizados por vía subcutánea (SC) con taquizoítos vivos; Grupo B (n = 24): animales inoculados con placebo (solución fisiológica estéril-SFE-). Como inmunógeno experimental se utilizaron taquizoítos vivos de la cepa de N. caninum NC-Argentina LP1 (Campero et al., 2015), los cuales se multiplicaron en células VERO mantenidas en medio con 2% de suero fetal bovino e incubadas en estufa con 5% de CO2. Los taquizoítos fueron cosechados durante su fase intracelular cuando se observó un 80% de infección celular. El inmunógeno fue aplicado en una dosis de 1×106 taquizoítos en 3 ml de SFE por vía subcutánea al inicio del ensayo (día 0). Luego de la inmunización se realizó un examen clínico general y se registró la temperatura rectal diariamente durante 5 días. Se realizaron muestreos de sangre para obtención de suero al día 0, 11, 21, 30 y 60 post inoculación (PI). Finalmente, se utilizó una técnica de ELISA indirecto para la determinación de IgG total con modificaciones como fue ya mencionado (Hecker et al. 2013). Las muestras de suero fueron analizadas por duplicado y el valor de densidad óptica fue convertido a un índice relativo porcentual (IRPC) usando la siguiente fórmula: IRPC = [(OD405 muestra − OD405 control negativo)/(OD405 control positivo − OD405 control negativo)] ×100. Un valor de IRPC ≥ 8.2 indicó un resultado positivo.La temperatura media observada en ambos grupos fue de 39,5 ± 0,06 °C durante los 5 días PI. Las temperaturas registradas en los animales no difirieron estadísticamente entre grupos ni a través del tiempo (P > 0,05). Los animales no registraron reacción inflamatoria evidente en el sitio de inoculación.Los valores de IRPC de los dos grupos experimentales obtenidos por ELISA se observan en la Figura 1. Se detectaron anticuerpos específicos en animales del grupo A desde el día 11 PI (8,71 ± 6.30), aunque los valores de IRPC recién fueron significativamente mayores respecto al grupo B a partir del día 21 PI (40,80 ± 6.44) (P < 0,001) y continuaron siendo elevados al día 30 (39,5 ± 7,50) y 60 PI (43 ± 10,9) (P < 0,001). No se observaron valores de IRPC mayores a 8 en el grupo B a través del tiempo.Figura 1: Cinética de anticuerpos específicos para Neospora caninum representada como una media de los valores de IRPC.Los resultados del presente trabajo evidencian que hembras prepúberes inmunizadas con la cepa NC-Argentina LP1 incrementaron significativamente sus niveles de anticuerpos al día 21 PI. Estos hallazgos coinciden con resultados previos obtenidos en otros trabajos, aunque en el presente trabajo los animales inmunizados no presentaron hipertermia PI (Innes et al. 2001, Williams et al. 2007, Hecker et al. 2013). Estos resultados preliminares obtenidos indican el desarrollo de una respuesta inmune activa. Para ampliar los estudios inmunológicos se procederá a evaluar la respuesta inmune mediada por células mediante la determinación de los niveles de citoquinas. Este ensayo continuará cuando estas hembras sean sexualmente maduras, momento en el que se evaluará la respuesta inmune generada durante su primera gestación y se comprobará si hubo transmisión vertical de la infección a la progenie de la cepa utilizada como inmunógeno vacunal.