AUSENCIA DE ANTICUERPOS ESPECIFICOS EN UNA VACA INFECTADA CON NEOSPORA CANINUM

GUAL I.; CAMPERO LM; HECKER YP; LEUNDA MR; CANO DB; VENTURINI MC; ODEÓN AC; MOORE DP

Jujuy

Encuentro; XXI AAVLD; 2016

AAVLD

El protozoo Neospora caninum provoca importantes pérdidas económicas en la producción bovina. Es considerado una de las principales causas de aborto bovino a nivel mundial y no existen métodos efectivos para su control. Para su diagnóstico se utiliza principalmente la serología; sin embargo, algunos estudios han reportado animales infectados seronegativos (McInnes et al., 2006; Yao et al., 2009; Benavides et al., 2012). En el presente trabajo se describe un caso de detección de N. caninum en una vaca seronegativa en sucesivos muestreos.El hallazgo se produjo en un estudio sobre caracterización de parasitemia en vacas naturalmente infectadas con Neospora caninum (Gual et al., 2016). La vaca analizada pertenecía al grupo control seronegativo no gestante. Durante el transcurso de la gestación se tomaron 23 de muestras de sangre con y sin anticoagulante EDTA. Para evaluar los niveles de anticuerpos para N. caninum se realizó inmunofluorescencia indirecta (IFI) (titulación final a partir de una dilución 1:25), ELISA indirecto (Civtest bovis Neospora, Hipra, Girona, España) e Immunoblot (IB) en condiciones no reductoras (dilución 1:100). Para este último, se consideró como positivo la detección de reacciones hacia 2 o más antígenos inmunodominates de movilidad relativa de 19, 29, 30, 33 y 37 kDa. Para la detección de N. caninum se extrajeron leucocitos por centrifugación en gradiente de Ficoll (Ficoll-Paque PLUS, GE Healthcare, Uppsala, Suecia). Se les extrajo ADN (5 x 106 leucocitos por muestra) con un kit comercial (DNeasy® Blood & Tissue Kit, QIAGEN, Austin, EE.UU.) y se realizó una PCR anidada (Buxton et al., 1998). El aislamiento del parásito se realizó por cultivo celular; 1x105 leucocitos por muestra, por triplicado, se sembraron en placas de 96 pocillos con monocapas de células VERO (1x106/ ml) y medio Earle?s suplementado con 2% de suero fetal bovino. El medio fue reemplazado a las 24 hs de la siembra y luego dos veces por semana durante un período no inferior a 60 días y se observó diariamente, mediante microscopio invertido, la presencia de efecto citopático y de parásitos asociados al mismo. Se efectuó la eutanasia del animal y se realizó PCR sobre muestras de cerebro, útero y ovario.Todos los muestreos resultaron negativos a la presencia de anticuerpos por las pruebas de IFI, ELISA e IB. Sin embargo, 3 de las 15 muestras de leucocitos procesadas resultaron positivas a PCR y se aisló N. caninum en 2 de las 23 muestras sembradas. También se detectó ADN de N. caninum en cerebro y útero.Si bien la inmunidad celular juega un rol crucial en la protección contra N. caninum, la detección de anticuerpos resulta de utilidad para su diagnóstico. La ausencia de anticuerpos específicos en animales infectados podría presentarse en los siguientes casos: infección reciente en la que todavía no hay producción de anticuerpos detectables, ausencia de exposición al antígeno por un tiempo prolongado, o en casos de inmunotolerancia (Yao et al., 2009). También podría ocurrir que en el huésped no se detecten anticuerpos hacia taquizoítos de N. caninum, que es el estadio parasitario que son capaces de detectar las técnicas utilizadas, pero que sí se produzcan anticuerpos frente a otros estadios parasitarios, como los bradizoítos (Benavides et al., 2012). Para evaluar esta última hipótesis se procederá a realizar un ELISA basado en la proteína recombinante SAG4 para la detección de anticuerpos anti-bradizoítos de N. caninum (Benavides et al., 2012). En este caso en particular los dos primeros postulados serían los menos probables ya que el parásito se detectó en leucocitos circulantes en 6 oportunidades durante 120 días de seguimiento.