ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN ENDOMETRIAL DE LOS RECEPTORES DE ESTRÓGENO Y PROGESTERONA DURANTE EL DIESTRO EN VACAS SUBFÉRTILES

JAUREGUIBERRY M; MADOZ L; QUINTANA S; BURUCÚA M; MARIN M; TIZZIANO M; PECORARO M; DE LA SOTA R

Córdoba

Simposio; 12° Simposio Internacional de Reproduccion Animal, IRAC; 2017

Instituto de Reproducción Animal de Córdoba (IRAC)

Los estrógenos (E2) y progesterona (P4) de origen ovárico regulan, a nivel uterino, la expresión de una amplia variedad de citoquinas y factores de crecimiento que cumplen un rol muy importante en el establecimiento y mantenimiento de la gestación. Estas hormonas ejercen su acción uniéndose a sus receptores (ER y PR), cuya expresión está regulada por ambas hormonas. La alteración en la expresión génica de los mismos podría estar relacionada con el desencadenamiento de las vacas repetidoras (VR, vacas vacías, clínicamente sanas y con ≥3 IA). Por lo tanto, el objetivo del presente trabajo es comparar la expresión endometrial de ARNm de ER y PR entre VR y vacas fértiles (CF, vacas preñadas dentro de las primeras 2 IA post parto), sin endometritis subclínica (ES) durante la etapa de diestro. Para la realización de este experimento se tomaron dos cepillados endometriales de cada VR (n= 16) y CF (n= 9) mediante la técnica de cytobrush. Uno de los cepillos se utilizó para el diagnóstico de ES (punto de corte para el diagnóstico de ES: ≥5% de neutrófilos) y posteriormente, junto con el otro cepillo, se utilizaron para el estudio de expresión génica a través de RT-PCR en tiempo real. Las muestras se almacenaron a -20°C en tubos eppendorf que contenían 1 ml de estabilizador de ARN (RNA later, Qiagen) hasta su procesamiento. Además, se tomó una muestra de sangre para medir las concentraciones de progesterona (P4) y así poder incluir solamente las vacas que se encontraban en diestro (≥1 ng/ml de P4). Se extrajo ARN de todas las muestras mediante Trizol y se generó ADNc. Para la determinación de los niveles relativos de expresión de cada marcador se aplicó el método ddCt., como gen de de referencia se utilizó la enzima gliceraldehído-3 fosfato deshidrogenasa (GAPDH) y como calibrador se utilizaron muestras de vacas que se encontraban en anestro. Los resultados demuestran que no se encontraron diferencias significativas en la expresión de ARNm de ER y PR entre VR y CF durante el diestro (P= 0.16 y P= 0.73, respectivamente). En cuanto a los PR, la expresión de los mismos en las células del epitelio luminal es baja a lo largo del ciclo estral, por lo que la evaluación de la expresión de los PR en células obtenidas por cepillado endometrial podría dificultar la detección de cambios en la concentración de estos receptores. Por otro lado, los cambios que normalmente se producen en la expresión génica de ER y PR durante el diestro, sumado al número relativamente pequeño de animales que se utiliza para este tipo de técnicas, dificulta aún más la detección de dichas diferencias en el caso que las hubiera. En conclusión, no hubo diferencias significativas en la expresión endometrial de los genes estudiados entre VR y CF. No obstante, los resultados obtenidos son de suma importancia para futuras investigaciones relacionadas con la subfertilidad en vacas lecheras.