CINÉTICA DE REPLICACIÓN IN VITRO DE HERPESVIRUS BOVINO TIPO 1 Y 5

MARIN MS; LEUNDA MR; VERNA AE; FAVERÍN C; PÉREZ SE; ODEÓN AC

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

Sociedad Argentina de Virología, Asociación Argentina de Microbiología

Determinar la cinética de replicación en cultivo celular es relevante para la caracterización de los virus. Si bien se conoce la susceptibilidad de varias líneas celulares a la infección por Herpesvirus bovino tipo 1 y 5 (BoHV-1 y 5), el comportamiento in vitro de cepas de campo de Argentina de ambos virus no ha sido profundamente estudiado. El objetivo de este trabajo fue evaluar la cinética in vitro de BoHV-1 y 5 en células MDBK y analizar su capacidad de replicación de acuerdo a dos protocolos de infección diferentes. Las células MDBK fueron infectadas con las cepas de referencia (BoHV-1 LA38 y BoHV-5 N569) y con aislamientos de campo de Argentina (BoHV-1 09/210 y BoHV-5 97/613) a una multiplicidad de infección de 0,1. Las infecciones se realizaron en forma simultánea al pasaje celular o en monocapas de células confluentes y preformadas de 24 h, al comienzo y final de la fase logarítmica de crecimiento, respectivamente. Las células se incubaron a 37 °C con 5 % de CO2 y los sobrenadantes se colectaron a las 24, 48 y 72 h post-infección (hpi). Se realizaron seis repeticiones y los controles negativos apropiados por tratamiento. Para la posterior determinación del título viral (TV) los sobrenadantes obtenidos  fueron conservados a -80 ºC. Las comparaciones de las medias cuadradas mínimas se analizaron por el test de Tukey-Kramer (p <0,05). Los TV promedios de N569, LA38, 97/613 y 09/210, independientemente del protocolo de infección y tiempo de cosecha, fueron 107,13, 106,74, 106,53 y 105,44 TCID50/ml, respectivamente. Estos valores difirieron entre las cepas evaluadas, excepto entre LA38 y 97/613. Al analizarse los virus en conjunto, el TV difirió a las 24, 48 y 72 hpi en monocapas preformadas. En las infecciones realizadas simultáneamente al pasaje celular, los TV no variaron significativamente entre los tiempos de cosecha, resultando superiores a los logrados con la infección en monocapa preformada a las 24 y 48 hpi. Las condiciones de infección estudiadas no tuvieron efecto sobre los TV al evaluarse los virus individualmente. Los perfiles de cinética de replicación fueron similares entre LA38, N569 y 97/613, incrementando el TV hasta 48 hpi y manteniéndose hasta 72 hpi. Sin embargo, el TV de 09/210 fue significativamente menor, mostrando un incremento gradual desde 24 a 72 hpi. La eficiencia de multiplicación viral fue mayor en las cepas de referencia, alcanzando TV de 107,6. Según nuestro estudio la cinética viral mostró un comportamiento similar en la replicación de BoHV-1 y 5 y una evidente relación entre la replicación de ambos virus y la fase del ciclo celular en la cual la infección tiene lugar. Estos datos resultan fundamentales para el diseño eficaz de experimentos in vitro, en la producción de vacunas y en la planificación de inoculaciones experimentales.