INVESTIGADORES
CERUTTI Estela Soledad
congresos y reuniones científicas
Título:
Derivatización/Separación Cromatográfica de Enantiómeros de Carnitina y Detección MS/MS para el Control de Calidad de Medicamentos de Amplio Uso
Autor/es:
A.C. ISAGUIRRE, M.R. CANALES, A.V. LAPIERRE, J. RABA, L.D. MARTINEZ, S. CERUTTI.
Lugar:
Santa Fe
Reunión:
Congreso; 6° Congreso Argentino de Química Analítica; 2011
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Química Analítica
Resumen:
Carnitina (Carn, C7H15NO3, 161 g
mol-1) es un metabolito endógeno
presente en mamíferos [1, 2]. Siendo
este compuesto quiral, sólo L-Carn ocurre
naturalmente y presenta propiedades farmacológicas y nutricionales importantes.
Investigaciones recientes han demostrado que D-Carn actúa como un inhibidor competitivo de los sistemas de
captación activos de L-Carn, lo cual conduce
a una carencia funcional de L-Carn en
los músculos esqueléticos y cardíaco, dando origen a miastenia y arritmias
cardíacas [3]. L-Carn puede sintetizarse
endógenamente o provenir de fuentes exógenas cómo los suplementos dietarios. Actualmente,
el contenido de D-Carnitina en
formulaciones farmacéuticas y nutricionales está limitado a un 4.0% por diversas
Farmacopeas Internacionales [4, 5]. En este sentido y luego de una búsqueda
exhaustiva en la literatura científica, se encontró que no existen métodos que
combinen la cromatografía líquida y la espectrometría de masas para la
separación y cuantificación de los enantiómeros de carnitina. En consecuencia, el presente trabajo se
basó en el desarrollo de una metodología sensible y selectiva para la resolución
cromatográfica y determinación cuantitativa de L- y D-carnitina mediante
un procedimiento de derivatización y separación asociada a ionización por
electrospray acoplada a un detector masa triple cuadrupolo operando en modo de
monitoreo de reacción múltiple (MRM). El procedimiento de derivatización se basó en la esterificación
del grupo hidroxilo quiral de carnitina mediante el uso del reactivo9-fluorenilmetil
cloroformato, generándose los derivados disterómicos no polares del analito
bajo estudio ((D,L)-Carn-FMOC). Luego, se procedió a la inyección de las
muestras en una columna cromatográfica de fase reversa (C18, 2.1 ×
50 mm, 1.7 µm) que resolvió a diferentes tiempos los enantiómeros derivatizados.
Posteriormente éstos fueron identificados y cuantificados empleando los siguientes
fragmentos iónicos del precursor de m/z 384 del compuesto resultante de la
derivatización, (D,L)-Carn-FMOC: 179
u. (ion de cuantificación), 206 u., 162 u., 144 u., 103 u., 85 u. y 60 u.
(iones de confirmación). Precisión (expresada como
desviación estándar relativa (RSD (%)) fue menor del 0.1% para los tiempos de
retención de los dos analitos (D,L-Carnitina)
y < 5.0% para sus áreas de picos, para la recuperación se obtuvieron valores
entre 90-102%. Los límites de detección para L y D-carnitina fueron de
1.0 y 3.0 µg L-1, respectivamente. El método propuesto se aplicó a suplementos
dietarios y medicamentos rotulados como L-carnitina
(comprimidos, bebibles e inyectables). Se detectaron concentraciones de ambos
enantiómeros en las muestras analizadas.