INVESTIGADORES
CERUTTI Estela soledad
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de una Metodología UHPLC-(+)ESI-MS/MS Rápida y Sensible para el Monitoreo del Contenido de Melatonina en Hollejos y Vinos
Autor/es:
GÓMEZ, F.; FERNÁNDEZ, M.A.; MARTINEZ, L.D.; RABA, J.; SILVA, M.F.; CERUTTI, S.
Lugar:
Santa Fe
Reunión:
Congreso; 6° Congreso Argentino de Química Analítica; 2011
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Química Analítica
Resumen:
Melatonina
(MEL, P.M. 232 g mol-1) es una hormona de la glándula pineal
involucrada en la regulación de procesos fisiológicos, incluyendo ritmo
circadiano y fotoperiodicidad. Es un potente antioxidante, promueve propiedades
inmunomodulatorias y citoprotectivas, mostrando efectos beneficiosos para el sistema
inmunológico. Su presencia en plantas superiores fue descubierta recientemente
y el conocimiento de su función in vivo
es muy limitado. En consecuencia, el empleo de metodologías analíticas que
permitan separarla y detectarla en plantas de manera sencilla, rápida y
confiable es de gran importancia. En este sentido, se procedió al desarrollo de
un método de análisis de melatonina en hollejos y vinos mediante separación
cromatográfica de ultra-alta resolución (UHPLC) acoplada a la determinación
mediante ionización por electrospray en modo positivo ((+)ESI) y asociada a detección
masa en tándem (MS/MS). Se evaluaron aspectos relacionados a la preparación y
limpieza de las muestras a través de filtrado-introducción directa y extracción
en fase sólida (SPE), metodologías cromatográficas de separación UHPLC basadas
en diversas fases estacionarias y móviles, condiciones de ionización y variables
operativas de fragmentación/detección del espectrómetro de masas tipo triple
cuadrupolo en modo de monitoreo de reacción múltiple (MRM). En este contexto, se
utilizaron muestras provenientes de uvas del varietal Malbec, año 2010. Luego de
su optimización con diferentes solventes, cartuchos de fase C8 se eligieron para la extracción de melatonina de
las muestras mencionadas. Debido a sus características químicas, se seleccionó una
columna de cromatografía líquida de interacción hidrofílica (HILIC) como fase estacionaria
y agua (A)/acetonitrilo (B) como fases móviles (0.45 mL min-1) para
la elución en modo gradiente de MEL (t = 0.0 min, B: 95%;
t= 3.0-4.0 min, B: 40%, t= 4.2 6.0 min, B: 95%).
En cuanto a la detección masas, se usaron dos transiciones provenientes de la
fragmentación del ión pseudomolecular de MEL ([M+H]+ (m/z) = 233) para
su identificación y cuantificación: 233 > 216 y 233 > 174, las cuales corresponden
a pérdidas de NH3 y del grupo CH3CONH2
de la porción alifática de la molécula. Los límites de detección (LoD)
y de cuantificación (LoQ) fueron de 10 ng L-1 y 100 ng L-1,
respectivamente. Se realizaron estudios de recuperación, repetitividad, reproducibilidad
y eficiencia de ionización. La metodología propuesta se aplicó a la detección
de melatonina en vinos y hollejos, las concentraciones detectadas fueron en el
orden de los ng L-1-µg L-1, respectivamente.