OPTIMIZACIÓN DE PRODUCCIÓN DE UN ANTÍGENO DE Leishmania braziliensis PARA EL DESARROLLO DE VACUNAS.

MIGUEL FERNÁNDEZ DE ULLIVARRI; ELISANGELA BES; AUGUSTO BELLOMIO; DIEGO J. MARCO

Jornada; XVIII Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores Augusto E. Palavecino; 2017

Introducción: Leishmaniasis comprende un grupo de enfermedades parasitarias endémicas del norte de Argentina, causadas por protozoarios flagelados del género Leishmania. Hoy en día no existen vacunas efectivas contra estas enfermedades, por lo cual es necesario el estudio de nuevos antígenos capaces de generar una respuesta inmune protectora. Objetivo: Optimizar la expresión heteróloga del antígeno recombinante LbAAg2 nativo y soluble, perteneciente a una cepa endémica de L. braziliensis. Materiales y Métodos: para la expresión de la proteína se empleó la cepa Escherichia coli BL21 DE3 transformada con el vector de expresión pIVEX-LbAAg2 (E. coli KmS2) en caldo LB. La optimización de la expresión de LBAAg2 se estudió en cultivos E. coli KmS2 de 1 ml en fase exponencial (DO600 0,6). Se evaluaron diferentes concentraciones de lactosa (0,01-0,5%) y tiempos de inducción (1-4 h) a 37 ºC y 180 rpm. Las células fueron lisadas por sonicación en 100 µl de tampón de lisis (NaH2PO4 50 mM, NaCl 300 mM, imidazol 10 mM, pH 8). Luego de una centrifugación a 12.000 rpm por 5 min, se colectaron los sobrenadantes y los sedimentos fueron disueltos en 100 µl de tampón de lisis con urea 8 M. Las muestras fueron analizadas por SDS-PAGE en geles de poliacrilamida 10%. La producción masiva de LbAAg2 se realizó a partir de 1 L de cultivo de KmS2 inducido con lactosa 0,1% durante 3 h a 37 ºC y 180 rpm. Resultados: La concentración de lactosa óptima fue 0,1%. El tiempo de inducción óptimo fue 4 h y 3 h para cultivos de 1 ml y 1 L, respectivamente, debido a que a 4 h de inducción la proteína formó cuerpos de inclusión. Conclusiones: Las condiciones de expresión pueden variar en función del volumen de cultivo empleado. Se optimizaron los parámetros de inducción para la expresión heteróloga del antígeno LbAAg2 en su forma nativa y soluble, necesaria para realizar posteriores estudios estructurales de la misma.