Caracterización molecular y funcional del transporte de agua en las células epiteliales renales humanas (CERH): acción de la toxina Shiga tipo 2 (Stx2) y su subunidad B (Stx2B)

PISTONE CREYDT V, GOLDSTEIN J, IBARRA C

Mar del Plata

Congreso; L Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Stx2 secretada por E.coli enterohemorrágico puede causar Síndrome Urémico Hemolítico (SUH). Una de las consecuencias más importantes del SUH es la acción tóxica de Stx2 sobre las células epiteliales tubulares renales que contribuyen al desarrollo de la insuficiencia renal aguda y su evolución a la cronicidad.Los objetivos del trabajo fueron caracterizar el transporte de agua a través de las CERH y analizar los cambios funcionales en presencia y ausencia de Stx2 y Stx2B.Los cultivos primarios de CERH se obtuvieron a partir de células epiteliales de corteza renal humana. La presencia de canales de agua (AQPs) y de sodio (ENaC y APXL) se evaluaron por RT-PCR y WB. La funcionalidad se analizó a partir de la absorción de agua (Jw) a través de monocapas de CERH crecidas sobre soportes permeables. La viabilidad celular se midió por incorporación de rojo neutro, la inhibición de síntesis de proteínas por captación de 32S-metionina, y la apoptosis celular por tinción con colorante de Hoescht.Los resultados indican que las CERH expresan AQP1, ?ENaC y APXL y tienen un Jw de 0,26 ± 0,02 µl.min(-1).cm(-2). El Jw disminuyó significativamente (p<0,05) con 10pg/ml de Stx2 luego de 1h de incubación. La inhibición de Jw fue dependiente del tiempo y la concentración de la toxina. Sin embargo cuando se usaron concentraciones y tiempos mayores de incubación con Stx2, se observó no sólo una inhibición del Jw sino también una disminución de la viabilidad, la síntesis de proteínas y estimulación de la apoptosis.Stx2B tambien inhibió el Jw en una manera dosis y tiempo dependiente pero a una concentración 10000 veces mayor. En estas condiciones no se observaron cambios en la viabilidad, la síntesis de proteínas y la apoptosis.