Actividad proinflamatoria y stress oxidativo en cultivos de una línea celular de epitelio respiratorio FQ

MARIÁNGELES CLAUZURE; ANGEL GABRIEL VALDIVIESO; MARÍA MACARENA MASSIP COPIZ; CONSUELO MORI; ANDREA V. DUGOUR; JUAN M. FIGUEROA; TOMÁS A. SANTA COLOMA

Congreso; LV Reunión de la Sociedad Latinoamericana de Investigación Pediátrica; 2017

Introducción: la inflamación y el stress oxidativo son centrales en la progresión del daño pulmonar en la FQ. La disfunción celular de la FQ puede generar ambas situaciones aún antes de que ocurran infecciones. La IL-1β, producida por el epitelio respiratorio, parece ser clave en esto; por otro lado las mitocondrias son elementos centrales en el stress oxidativo y también se ha postulado su disfunción en la FQ.Objetivos: estudiar la regulación de la IL-1β, y la actividad mitocondrial, en cultivos de epitelio respiratorio FQ. Material y Métodos: se cultivó una línea de epitelio respiratorio FQ y la misma línea con el gen CFTR reestablecido. Ambos tipos celulares se trataron con IL-1β exógena, antiIL-1β, anti receptor IL-1β, y un inhibidor del CFTR. Se aumentó también el Cl- intracelular tratándolas con ionóforos. En todos estos cultivos se midieron las concentraciones intracelulares de IL-1β-ARNm, IL-1β inmadura y madura, y la secreción de IL-1β al medio. Se aislaron mitocondrias de los diferentes grupos y se determinaron cantidad y actividad del Complejo Mitocondrial 1 (mCx-I), y niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) en el citosol y en las mitocondrias.Para el análisis estadístico se utilizaron los tests de ANOVA y Tukey.Resultados: las células FQ liberan 40 % más de IL-1β que las controles. La inhibición del CFTR en las células control aumentó la IL-1β. Las concentraciones de Cl- intracelular son mayores en las células FQ y en las células control con CFTR inhibido. El aumento del Cl- intracelular por ionóforos aumentó la expresión de ARNm IL-1β, y de IL-1β inmadura y madura intracelulares, y su secreción. Los tratamientos con bloqueante de IL-1β y anti receptor IL-1 inhibieron estos cambios. El aumento de la IL-1β en las células FQ se asoció a una reducción del 50% en el mCx-I y a un aumento de las ROS. La adición de IL-1β en células con CFTR reestablecido también redujo el mCx-I y aumentó las ROS. La incubación con bloqueante de IL-1β o anti receptor IL-1 restauró la actividad de mCx-I y redujo las ROS a valores normales en las células FQ. En todos los ensayos las mediciones se realizaron por triplicado y los datos se expresaron como la media ± SE de tres experimentos independientes (n=3) y p