EFECTO DE LA L-CARNITINA SOBRE LA MADURACIÓN IN VITRO DE OVOCITOS PORCINOS, CRIO TOLERANCIA A LA VITRIFICACIÓN Y COMPETENCIA PARA EL DESARROLLO EMBRIONARIO IN VITRO

CRUZANS, PR.; MARURI, A.; LORENZO, MS.; TELLO, MF.; LOMBARDO, DM.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; V Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2015

Secretaría de Ciencias y Técnica - Escuela de Graduados (FVET-UBA)

?EFECTO DE LA L-CARNITINA SOBRE LA MADURACIÓN IN VITRO DE OVOCITOS PORCINOS, CRIO TOLERANCIA A LA VITRIFICACIÓN Y COMPETENCIA PARA EL DESARROLLO EMBRIONARIO IN VITRO". CRUZANS P, MARURI A, LORENZO S, TELLO F, LOMBARDO D. Cátedra de Histología y Embriología, INITRA, FCV, UBA. La vitrificación es una técnica de criopreservación que consiste en el enfriamiento rápido de las células en un medio líquido, en ausencia de formación de cristales de hielo. El gran contenido de lípidos intracelulares en los ovocitos porcinos dificulta su criopreservación. La L-carnitina (LC) desempeña un papel importante en el catabolismo de los lípidos, permitiendo el transporte de ácidos grasos desde el citosol a las mitocondrias, donde se metabolizan a través de la beta oxidación. Tiene actividad antioxidante y en ovocitos se observó que mejora la maduración in vitro y el posterior desarrollo embrionario, modifica la distribución de los lípidos intracitoplasmáticos y la actividad mitocondrial y, en ratones y bovinos, mejora la criopreservación. Hasta la fecha, no hay reportes de cómo actúa la LC en la criopreservación de ovocitos porcinos. El objetivo es evaluar si el agregado de LC al medio de maduración redistribuye y/o disminuye la cantidad de lípidos intracitoplasmáticos, favorece la función mitocondrial y disminuye la concentración intracelular de especies reactivas de oxígeno favoreciendo la maduración ovocitaria, mejorando la calidad embrionaria y la criotolerancia a la vitrificación de los ovocitos porcinos madurados in vitro. Los complejos cumulus-ovocito (COCs) se obtendrán por aspiración folicular de ovarios de cerdas de faena. Los COCs se madurarán in vitro por 42-44 h sin LC (control) o con distintas concentraciones de LC en el medio de maduración. Se evaluará la maduración nuclear (Hoechst 33342), la distribución de los lípidos intracelulares por la tinción con rojo Nilo y el desarrollo embrionario para seleccionar la concentración adecuada de LC que se utilizará para madurar in vitro a los ovocitos que serán vitrificados. Los ovocitos denudados madurados con o sin LC se vitrificarán utilizando como soporte cápsulas BEEM. Luego, en los ovocitos desvitrificados se evaluará apoptosis temprana (anexina V-IP) y tardía (TUNEL), distribución de los lípidos intracelulares actividad mitocondrial (JC-1), concentración intracelular de ERO, desarrollo embrionario y en los embriones apoptosis tardía (TUNEL).