Cocultivo con células de granulosa bovina (pasaje 1): efectos sobre los niveles de ERO y la maduración citoplasmática de ovocitos bovinos

MARURI, A.; LOMBARDO, DM.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; V Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2015

Secretaría de Ciencias y Técnica - Escuela de Graduados (FVET-UBA)

COCULTIVO CON CÉLULAS DE GRANULOSA BOVINA (PASAJE 1): EFECTOS SOBRE LOS NIVELES DE ERO Y LA MADURACIÓN CITOPLASMÁTICA DE OVOCITOS BOVINOS MARURI A, LOMBARDO DM. INITRA, FCV, UBA La producción in vitro de embriones (PIV) es un proceso caracterizado por la recuperación y la maduración de los ovocitos (MIV), la fecundación (FIV) y el cultivo in vitro (CIV) de embriones producidos. Varios estudios indican que la calidad de los ovocitos es el principal factor que afecta los rendimientos. Marcadores intrínsecos como la apoptosis y los niveles de especies reactivas del oxígeno (ERO) han sido reportados como indicadores de la competencia de los ovocitos. Varios sistemas de cocultivo con células somáticas se utilizaron para optimizar la PIV. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del cocultivo con células de granulosa bovina del pasaje 1 (CGB-P1) sobre los niveles de ERO de ovocitos bovinos y la maduración citoplasmática a través del porcentaje de clivaje posFIV. Células de granulosa fueron obtenidas por punción folicular de ovarios de faena en fase luteal, cultivadas hasta confluencia en medio DMEM-F12 suplementado y criopreservadas. Complejos cumulus ovocito clase A, se aislaron y maduraron in vitro durante 22 h en dos grupos: control (C) en TCM 199+10% SFB y cocultivo con CGB-P1 (G). Los niveles de ERO fueron determinados por la intensidad de la fluorescencia del 2?,7?-diclorodihidrodiacetato de fluoresceína determinado por valoración de la transmitancia (T) en ambos grupos. Asimismo, se realizó la FIV con 1x106 espermatozoides/mL durante 5 h de coincubación, en medio BO, utilizando en este caso gonadotrofinas durante la MIV en el grupo control. Luego, los presuntos cigotos fueron cultivados en medio SOF modificado en atmósfera con 5% de CO2 saturada de humedad a 39 °C. En el día 2 posFIV se determinó bajo lupa estereoscópica el porcentaje de embriones clivados. El cocultivo con CGB-P1 incrementó significativamente los niveles de ERO respecto del control (TC=26, n=72; TG=39, n=65) (p≈0). Los resultados preliminares indicarían porcentajes de clivaje similares (cercanos al 80%) (n=254) utilizando CGB-P1 o gonadotrofinas durante la MIV. Las CGB-P1 incrementan los niveles de ERO sin evidenciar efectos nocivos, contrariamente incrementan los porcentajes de maduración nuclear respecto del control. De esta forma, planteamos a las CGB-P1 como una alternativa al uso de hormonas, debiéndose evaluar su efecto sobre la calidad y cantidad de blastocistos.