Acción del tratamiento con células madre de médula ósea sobre la matriz extracelular endometrial

FUMUSO, E.; CARMO, MT.; HERRERO, MF.; CANTATORE, SE.; LANDIM, FC.; LOMBARDO, DM.; ROSATTI, JJ.; REDOLATTI, C.; ALVARENGA, MA.

San Isidro, provincia de Buenos Aires

Conferencia; XXV Conferencias Internacionales de Veterinaria Equina; 2014

Asociación Argentina de Veterinaria Equina

Introducción: Recientemente el tratamiento con células madre de médula ósea autóloga (CM) en yeguas con endometrosis mejoró la distribución y la densidad glandular. La Alfa-actina de músculo liso (SMA) es un marcador funcional para los subtipos de fibroblastos que remodelan la matriz extracelular. La terapia con CM modificaría la matriz extracelular uterina. Objetivo/Hipótesis: La terapia con CM actuaría sobre el colágeno y la SMA en el útero de yeguas con endometrosis colaborando en su remodelación y mejora. Materiales y métodos: Dieciocho biopsias endometriales fueron tomadas de nueve yeguas (edad 14-23 años)con endometrosis. Nueve biopsias fueron obtenidas en el día 0 (D0) pre-administración del tratamiento con CM autólogas. Para el tratamiento se inyectó un total de 8x106de CM en un volumen de 0,5 ml siguiendo una línea horizontal desde el extremo de un cuerno uterino al otroen 20 puntos diferentes. Las inyecciones se realizaron por histeroscopia con una aguja diseñada para procedimientos endoscópicos. Sesenta días más tarde (D60) se obtuvo una segunda biopsia de cada yegua. Las biopsias se fijaron en solución Bouin de fijación, y luego en etanol al 70 % hasta la inclusión en parafina. Secciones seriadas (4 µ) fueron montadas en portaobjetos. Para la medición de colágeno total se utilizó la técnica de coloración de Picrosirius Red. Para inmunohistoquímica de SMA, las secciones se incubaron con un anticuerpomonoclonal de anti actina de músculo liso anti-humano (DAKO) diluido 1/100, a 4ºC durante 12 h. Se utilizó el sistema Dako LSAB?+ kit/HRP, y como coloración de contraste hematoxilina de Mayer. Las imágenes fueron capturadas con una cámara Leica ICC50HD incorporada a un microscopio Leica DM500 con magnificaciones de x200 y x400, utilizando el programa ?Leica Application Suite EZ?. Se analizaron ocho imágenes de cada muestra para la detección tanto de Colágeno como de SMA, ax400 utilizando el programa Q-Win Plus Leica 2003. Se determinó área de tinción y de inmunomarcado (% campo por imagen) se expresó en micras cuadradas. Los datos se analizaron con GraphPad-InStat a través del Test ?t? para datos pareados, el nivel de significancia se estableció en p