Maduración in vitro de ovocitos bovinos en co-cultivo con células somáticas (de granulosa)

MARURI, A.; LOMBARDO D.

Buenos Aires

Jornada; Terceras Jornadas de Jóvenes Investigadores en Ciencias Veterinarias 2013; 2013

Subsecretaría de Ciencia y Técnica. Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA.

La maduración in vitro constituye una etapa decisiva en el rendimiento del proceso de producción in vitro de embriones. El co-cultivo con células somáticas se ideó hace varias décadas en un intento de mejorar el desarrollo y la viabilidad de embriones mamíferos producidos in vitro. A pesar de esto, poco se sabe sobre los mecanismos subyacentes a los efectos beneficiosos del mismo, por lo que la comprensión de las interacciones básicas podría permitirnos aprovechar plenamente su potencial. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de las células de granulosa (CG) sobre la maduración meiótica de ovocitos bovinos. Se obtuvieron complejos cumulus ovocito por punción folicular de ovarios de vacas recientemente faenadas. Se seleccionaron bajo lupa estereoscópica aquellos con ooplasma homogéneo y cumulus compacto y se co-incubaron con Bovine Granulosa Cell Line-1 (BGC-1) utilizando una densidad de siembra baja (50 cél/mm²). Luego de 22 hs. de incubación (39°C, 5 % CO2), los ovocitos fueron denudados y teñidos con Hoechst 33342. La presencia de la Metafase II y el primer corpúsculo polar indicó maduración meiótica. Las tasas de maduración nuclear en co-cultivo con BGC-1 no tuvieron un comportamiento homogéneo, variando entre el 11 % y el 85 % con porcentajes de maduración nuclear aceptables en el control (88,8 %, 71,4 %, 84 %, 70,37 % y 71,43 %), teniendo en cuenta la no utilización de hormonas. La variabilidad encontrada no permite obtener conclusiones claras sobre el efecto del co-cultivo. Existen reportes en los cuales las células de granulosa utilizadas en co-cultivo para la maduración ovocitaria en altas concentraciones bloquean la reanudación de la meiosis, sin embargo, no fue demostrado dicho efecto utilizando células de línea BGC-1. Resultados propios recientes indicarían que la utilización de células granulosas del primer pasaje podrían incrementar las tasa de maduración respecto del control, o al menos no afectarla. Ensayos pendientes determinarán su influencia en estadios posteriores en la producción in vitro de embriones.