Efecto De Los Diferentes Agentes Crioprotectores En La Preservación De La Estructura Histológica De Folículos Pre Antrales De Sus Scrofa Vitrificados

GABRIEL, P.; TORRES, P.; BOVIEZ, JD.; CISALE, H.; LOMBARDO, DM.; FISCHMAN, ML.

Rosario

Jornada; XIII Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2012 de la Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Rosario; 2012

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Rosario

La vitrificación de tejido ovárico permite conservar gran cantidad de ovocitos contenidos en folículos preantrales (FPA). A diferencia de lo que ocurre en folículos más desarrollados, estos ovocitos son más pequeños, están rodeados por menor cantidad de células de la granulosa, presentan baja tasa metabólica y carecen de zona pelúcida y de gránulos corticales. Además, la obtención de las muestras a conservar es independiente de la edad del animal y del momento del ciclo estral. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de dos agentes crioprotectores permeables (ACP), Etilenglicol (E) y Dimetilsulfóxido (D), o la combinación de ambos (ED) en presencia de sacarosa como ACP no permeable, en la preservación de la estructura histológica de FPA porcinos (Sus scrofa) vitrificados. Se utilizaron ovarios de faena (n=10), se tomaron muestras para ensayos de toxicidad (Tox) y de vitrificación (Vit). El control se fijó con solución de Bouin directamente, los grupos Tox y Vit se expusieron primero a una solución de equilibrio con 15% de ACP permeable y sacarosa (0,25M) y luego a la solución de vitrificación conteniendo 30% E, 30% D ó 15% E + 15% D y sacarosa (0,25M) en todos los casos. Las muestras Tox fueron lavadas y fijadas. Las muestras Vit fueron llevadas a nitrógeno líquido durante una semana y luego fijadas. La evaluación morfológica se realizó sobre cortes histológicos teñidos con Hematoxilina-Eosina, con microscopía de campo claro (400X). Los folículos primordiales y primarios se clasificaron en normales o degenerados, cuando el ovocito y/o células de la granulosa se encontraban dañados. Para esto se tuvo en cuenta el grado de picnosis nuclear, la integridad de la membrana nuclear, el grado de vacuolización del citoplasma así como el grado de picnosis e integridad de las células de la granulosa. En ambos ensayos (Tox y Vit) se observó un incremento en el porcentaje de folículos dañados tanto primordiales como primarios. La utilización de etilenglicol permitió preservar un mayor número de FPA primordiales sin alteraciones morfológicas, mientras que en las muestras expuestas a Dimetilsulfóxido y a la combinación de ED, se redujo significativamente el porcentaje de FPA primordiales normales (Control: 87%; E: 52%; D: 17% y ED: 26%; Prueba de Friedman; p<0,05). Con respecto a los FPA