INVESTIGADORES
LORENZO PISARELLO Maria Jose
congresos y reuniones científicas
Título:
Diseño de sondas fluorescentes para fish y optimización de la técnica correspondiente para propionibacterias lácteas
Autor/es:
BABOT, J; LORENZO PISARELLO, MJ; PÉREZ CHAIA, AB; APELLA, MC; GONZÁLEZ, S
Lugar:
La habana, Cuba
Reunión:
Congreso; Biotecnologíahabana 2008; 2008
Resumen:
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Las propionibacterias son responsables de la
apertura de la masa y del sabor y aroma de diversos quesos. La fermentación
propiónica ha sido explotada para la manufactura de pan y productos vegetales
fermentados para consumo humano. En la identificación de estas bacterias se han
aplicado por años sólo criterios bioquímicos, pero estos análisis solo permiten
la identificación de bacterias cultivables. La técnica de Hibridización
Fluorescente In Situ (FISH) detecta
secuencias de ácidos nucleicos utilizando sondas, marcadas con un compuesto
fluorescente, que hibridizan específicamente a su secuencia blanco
complementaria dentro de una célula intacta. Esta metodología no se ha descrito
aún para propionibacterias lácteas, lo que resulta de gran interés biotecnológico
y constituye el objetivo de este trabajo. Para esto, se diseñaron tres sondas: Pap,
Pj y Pfr específicas para P. acidipropionici, P.
jensenii y P freudenreichii,
respectivamente. El método
incluye cuatro etapas: fijación, permeabilización, hibridización y lavado. En el
primer paso se analizaron dos protocolos de fijado, con y sin paraformaldehído.
En el paso siguiente, se estudiaron distintas concentraciones de
lisozima (0,1; 0,5; 1 y 5mg/ml), tiempos (5; 10 y 15 minutos) y temperaturas de
incubación (4; 25 y 37ºC).
Mientras que en la etapa de hibridización, se probaron diversas temperaturas (37;
45; 50; 55; 60 y 70ºC).
Las condiciones óptimas para la metodología utilizada son las que incluyen
paraformaldehído, incubación con lisozima 1mg/ml durante 10 minutos a 25ºC y temperatura de
hibridización de 45ºC
para P. acidipropionici y P.
freudenreichii, y 50ºC para P. jensenii.