Effects of dexamethasone on the survival of retinal pigment epithelial cells

MARQUIONI-RAMELLA, MELISA; TATE PS; MARAZITA MC; SUBURO AM

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso AIVO (Asociación de Investigación en Visión y Oftalmología) - III Joint Meeting AIVO-BRAVO; 2016

AIVO-BRAVO

Objetivos: Los glucocorticoides (GCs) son de uso frecuente y de gran importancia en oftalmología para tratar diversas condiciones o enfermedades oculares. La dexametasona (DEX), es frecuentemente utilizada en el tratamiento del edema macular diabético. Por lo tanto, estudiamos la viabilidad de las células ARPE-19 (línea celular de epitelio pigmentario de la retina, EPR, humano) expuestas a diferentes concentraciones de DEX en medios con diferente contenido de glucosa y suero. Métodos. Se emplearon medios DMEM con baja y alta glucosa (LG-DMEM, 5.6 mM y HG-DMEM, 25 mM), con 1 o 10% de suero fetal bovino (S1 y S10), con distintas concentraciones de DEX-fosfato (0, 0.08, 0.32 o 1.28 mM,). Después de 24 h de tratamiento, se evaluó la inducción de muerte celular mediante naranja de acridina/bromuro de etidio (AO/EB), y la viabilidad celular mediante 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). Además, se evaluaron dos marcadores de diferenciación del EPR: las proteínas retinoid isomerohydrolase (RPE65) y cellular retinaldehyde binding protein (CRALBP), mediante Western blot. Resultados. Los niveles más altos de DEX-fosfato (1.28 mM) resultaron tóxicos en todas las condiciones. Las concentraciones más bajas (0.08 mM) aumentaron la muerte celular en los medios con baja glucosa (17-18%), independientemente de los niveles de suero. El aumento de muerte celular en alta glucosa no fue significativo. En el ensayo de MTT, los niveles de OD 27 % superiores en HG-DMEM-S10 que en los restantes medios. DEX-fosfato 0.08 mM redujo la OD aproximadamente 60% en los cultivos S1, y 40% en los S10, aún en alta glucosa. La concentración de glucosa no modificó significativamente los niveles de CRALBP en los medios S10, pero aumentó los de RPE65. En presencia de 0.08 mM DEX-fosfato los niveles de CRALBP disminuyeron un 40% en LG-DMEM-S10 y solo en un 10% en HG-DMEM-S10. Los niveles de RPE65 siguieron un patrón semejante. Conclusiones. DEX-fosfato presentó toxicidad para las células ARPE-19, que parece exacerbarse en los medios con baja glucosa.