Caracterización de la actividad b-xilosidasa durante la maduración de frutilla

BUSTAMANTE C, ROSLI H, CIVELLO M, MARTÍNEZ G

Santa Rosa, La Pampa. Argentina

Congreso; XXV Reunión de la Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal (SAFV); 2004

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal (SAFV)

Durante la maduración de los frutos carnosos se producen una serie de cambios fisicoquímicos, entre los que se destaca un ablandamiento progresivo. Precisamente, las principales causas de este ablandamiento son los cambios y la degradación de los diferentes componentes de la pared celular. La frutilla es un fruto blando, con una velocidad de maduración muy elevada y rápido ablandamiento, que determina una vida postcosecha muy breve. Este proceso estaría asociado con un incremento en la solubilidad de pectinas (Nogata, et al., 1996) y una reducción en la masa molecular de hemicelulosas (Huber, 1984). La xilosa es un componente abundante de la pared celular vegetal, formando parte de las hemicelulosas y pectinas. Las hemicelulosas están compuestas principalmente por xiloglucanos y xilanos. Los xiloglucanos probablemente sean degradados por endoglucanasas (Brummel & Harpster, 2001) mientras que los xilanos son degradados por la acción de endo b-1,4 xilanasa, que ataca los enlaces glucosídicos b-1,4 entre D-xilosas para producir xilooligosacáridos, y b-xilosidasa, la cual libera residuos de D-xilosa a partir de los xilooligosacáridos (Cleemput et al., 1997). Si bien los genes que codifican para xilanasas y b-xilosidasas han sido extensivamente estudiados en hongos patogénicos (Margolles-Clark et al., 1996) es muy escasa la información en plantas. En el presente trabajo analizamos la actividad b-xilosidasa durante la maduración del fruto de frutilla con el fin de establecer su posible rol en el proceso de ablandamiento. Trabajos previos realizados en nuestro laboratorio permitieron obtener un fragmento de ADNc (denominado FAXyL1) que codifica para una b-xilosidasa. Utilizando como sonda un fragmento de FAXyL1 marcado con 32P-dATP se inició la búsqueda del ADNc completo en una biblioteca de ADNc de frutos maduros. Como resultado de la misma se obtuvo un clon 700 pb más largo a partir del extremo 5’. El análisis filogenético de la secuencia de aminoácidos predicha muestra una elevada identidad de secuencia con xilosidas de plantas. Cuando medimos actividad b-xilosidasa en distintas variedades de frutilla, observamos que la misma es mayor para la variedad más blanda , mostrando en todos los casos un máximo en el estadio más maduro. Para estudiar los niveles de proteína, se clonó un fragmento de FAXyL1 en el vector de expresión pET24a. La proteína sobreexpresada se purificó a partir de cuerpos de inclusión y se utilizó para generar anticuerpos específicos en conejo. Análisis Western blot detectaron la presencia de 3 bandas proteicas las cuales podrían corresponder a diferentes isoenzimas. Una de ellas se mantendría constante a lo largo de la maduración del fruto. Las otras, serían inducidas en los estadios más maduros del fruto, siendo sus niveles superiores en la variedad más blanda.