Optimización de una técnica de extracción de ARNs pequeños en muestras de plasma seminal para su potencial uso como biomarcadores.

ZOFF, LUCIANA; CALVO, KARINA; PEREZ, MARIANA; CARBONARO, MARINES; SERPA IDELMA; SPINELLI, SILVANA V.

Rosario

Congreso; XVIII Congreso y XXXVI Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2016

Sociedad de Biología de rosario

La infertilidad afecta al 15% de la población mundial y el factor masculino está involucrado en aproximadamente la mitad de los casos. En la actualidad se cuentan con escasas técnicas de diagnóstico eficaces, precisas y no invasivas que permitan caracterizar en profundidad la infertilidad masculina. El espermograma es el estudio más utilizado para predecir alteraciones reproductivas masculinas aunque la alta variabilidad entre las muestras de semen no lo hacen un buen predictor general de fertilidad. Estos hechos conducen a una dificultad en el abordaje de los tratamientos de reproducción asistida y ponen en evidencia la necesidad de contar con nuevas herramientas diagnosticas en esta área. Entre estas, los ARNs pequeños se proyectan como buenos candidatos para constituirse en nuevos biomarcadores. Los ARNs pequeños son un tipo de ARN no codificante de entre 20 y 30 nucleótidos de longitud. Estas moléculas regulan diversos procesos biológicos, en general interfiriendo con la traducción del ARN mensajero a través de interacciones ARN-ARN. Existen distintos tipos, las clases mejor estudiadas son los ARNs pequeños de interferencia (siARNs), microARNs (miARNS) y ARN asociados a Piwi (piARNS). Los miARNS generalmente regulan la expresión de genes endógenos y se hallan involucrados en una amplia gama de eventos celulares y de desarrollo. Por otra parte, los piARNs son un amplio grupo de ARNs pequeños no codificantes con importantes funciones biológicas en células germinales en donde mantienen la integridad del genoma a través del silenciamiento de retrotransposones. Diversas evidencias indican que deleciones en los genes implicados en la biogénesis de los piARNS o su expresión defectuosa se asocian con defectos en la espermatogénesis.Los perfiles de expresión de ARNs pequeños con frecuencia se encuentran alterados durante el desarrollo de procesos patólogicos. Además, otra característica particularmente atractiva de estas moléculas en cuanto a su utilización como biomarcadores no invasivos es su presencia en fluidos biológicos extracelulares incluyendo plasma, suero, lagrimas, orina, líquido cefalorraquídeo, leche materna, saliva y plasma seminal. Asimismo, son altamente estables y su cuantificación es sencilla y altamente reproducible.En base a los expuesto, el presente trabajo describe la puesta a punto de una técnica de detección de ARNs pequeños a partir de muestras de plasma seminal, para lo cual se evalúan distintas variantes del protocolo tradicional de extracción de ARN con TRizol.