EFECTO DEL COCULTIVO DE CÉLULAS LUTEALES PORCINAS Y DEL MEDIO DE CULTIVO CONDICIONADO SOBRE LA MADURACIÓN NUCLEAR IN VITRO.

TEPLITZ, G.; LORENZO, MS.; CRUZANS, PR.; MARURI, A.; LOMBARDO, DM.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; VII Jornadas de Jóvenes Investigadores 2017; 2017

Secretaría de Ciencia y Técnica FVET-UBA

La producción in vitro de embriones porcinos es una biotecnología poco eficiente. La maduración nuclear y citoplasmática no han sido bien descriptas en esta especie, y esto se ve reflejado en inconvenientes para la formación de los pronúcleos y la existencia de altos porcentajes de polispermia. La utilización de un cocultivo estandarizado recrearía de mejor forma el ambiente en el cual se desarrollan estos procesos in vivo. La elección de células luteales porcinas (CLP) en monocapa para el cocultivo de complejos cumulus ovocito (COC), se fundamenta en la producción basal de progesterona (P4), hormona que posee un efecto antiapoptótico y es un mediador en la cascada de la reanudación meiótica. La utilización del medio de cultivo condicionado (MC) por células luteales porcinas se fundamenta en su constitución de componentes biológicamente activos y sintetizados por las células cultivadas. El objetivo de este trabajo fue comparar el efecto del cocultivo con CLP y MC sobre la maduración nuclear de ovocitos porcinos. Para la obtención del cultivo de CLP y de COC se utilizaron ovarios provenientes de faena. Los COC se obtuvieron por punción - aspiración folicular y luego se maduraron in vitro durante 44 h. La maduración in vitro (MIV) se realizó en gotas de 100 µL usando en todos los casos como medio base el TCM 199 suplementado con fluido folicular porcino y antibióticos. Los grupos experimentales fueron: control sin hormonas (C-hMG), control con hormonas (C+hMG), cocultivo con CLP pasaje 1 (CLP-1) y MC. Las CLP-1 se sembraron en una concentración de 2 x 104 cél/mL 24 h previas a la MIV y el MC empleado correspondió a este cultivo. Se evaluaron los porcentajes de maduración nuclear mediante la tinción con Hoechst 33342 (visualizando la placa metafásica) y se consideró significativo un p˂ 0,05. Se observó una diferencia significativa entre el cocultivo y el MC (cocultivo: 72%, n= 104 y MC: 59%, n= 95). No se observaron diferencias significativas entre el cocultivo y C+hMG (79,5%, n= 75) y entre MC y C-hMG (47%, n= 95). En base a lo observado, se concluye que la maduración nuclear en cocultivo con CLP-1 es similar a la maduración nuclear con el agregado de hormonas. Y que, la maduración nuclear con MC es similar a la maduración nuclear sin el agregado de hormonas. El uso de MC no ejerce el mismo efecto que el cocultivo, pudiendo suponer (sin descartar la existencia de factores solubles que pueden estar inactivados en el caso del MC), que el contacto directo entre CLP-1 con los COC o la señalización parácrina que se genera podría estar relacionada con el efecto observado. La utilización de este sistema de cocultivo, y no de su MC, permitiría reemplazar el agregado de hormonas a los medios de MIV manteniendo los porcentajes de maduración nuclear.