EFECTOS DEL COCULTIVO DE CÉLULAS EPITELIALES OVIDUCTALES PORCINAS SOBRE LA CALIDAD Y DESARROLLO DE EMBRIONES PORCINOS PRODUCIDOS IN VITRO

LORENZO, MS.; BERTONAZZI, A.; LOMBARDO, DM.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; VII Jornadas de Jóvenes Investigadores 2017; 2017

Secretaría de Ciencia y Técnica FVET-UBA

En la especie porcina, los porcentajes de blastocistos obtenidos son bajos y los embriones obtenidos son de menor calidad en comparación con otras especies, debido, en gran parte, a que las condiciones de cultivo embrionario in vitro resultan subóptimas en relación al ambiente in vivo. El oviducto interviene en numerosas funciones reproductivas entre ellas, el desarrollo embrionario temprano. Las células epiteliales oviductales sintetizan macromoléculas que son secretadas a la luz, generando un ambiente adecuado para las funciones oviductales. El objetivo de este trabajo consiste en evaluar el efecto del cocultivo de embriones porcinos producidos in vitro con células epiteliales oviductales porcinas (CEOP) sobre el desarrollo embrionario in vitro y la calidad de los embriones obtenidos. En una primera instancia, se evaluaron diferentes metodologías para la obtención de CEOP así como también distintos sistemas y condiciones de cultivo. Se utilizaron oviductos en hembras de faena en diestro (cuerpos lúteos presentes en ovario) y las células se obtuvieron por presión externa realizada con porta objetos. La suspensión celular se disgregó mecánicamente y se sembró en medio DMEM + F12 suplementado con 20% suero fetal bovino, antibióticos y antifúngico. Se obtuvo un cultivo mixto con células en monocapa y vesículas en suspensión, que mantuvieron su viabilidad por al menos 7 días y el movimiento ciliar luego de 72 h de cultivo. La naturaleza epitelial se verificó por la presencia de cilios en la superficie de las vesículas (observadas con microscopia de contraste de fase) y por inmunocitoquímica (ICQ) con anticuerpos anti caderina E en las células en monocapa. Los ensayos de ICQ se complementaron con anticuerpos anti receptores de estrógenos (ER) y anti receptores de progesterona (PR). El 6,6% (± 0,06%) de las células (n= 1556) expresó ER nucleares, mientras que el 43,88% (± 0,017%) (n= 1796) expresó PR nucleares. A futuro, se procederá a realizar ensayos de cocultivo de embriones con el pasaje 1 de CEOP en monocapa y vesículas de CEOP en suspensión y se evaluaran los porcentajes de desarrollo embrionario. Como parámetros de calidad se utilizarán la cuantificación del número de blastómeras, la evaluación de apoptosis por TUNEL y la determinación de marcadores de pluripotencialidad y proliferación por inmunofluorescencia. El cocultivo de embriones porcinos obtenidos in vitro con células epiteliales oviductales porcinas (CEOP) favorecería el desarrollo in vitro y la calidad de los embriones obtenidos, al simular el ambiente in vivo. El cultivo obtenido podrá ser utilizado no solo para cocultivo con embriones sino también como modelo para estudiar las interacciones de las gametas y embriones con el oviducto.