LAS CÉLULAS DEL CUMULUS COMO PREDICTORAS DE LA COMPETENCIA PARA EL DESARROLLO DE OVOCITOS PORCINOS TRATADOS CON DIMETILTIOUREA

LORENZO, MS.; CRUZANS, P.; TEPLITZ, G.; MARURI, A.; TELLO, MF.; LOMBARDO, DM.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; V Jornadas Internacionales del INITRA; 2017

Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal INITRA (FVET-UBA)

Las condiciones isquémicas a las que están expuestos los ovarios de faena y la producción de especies reactivas derivadas del oxígeno (ERO) durante la reoxigenación al momento de las aspiración folicular, inducirían apoptosis y podrían dañar la calidad ovocitaria. El objetivo del trabajo fue evaluar el efecto de la dimetiltiourea (DMTU) como suplemento en el medio de recolección y búsqueda de los complejos cumulus ovocito porcinos (COC) sobre la apoptosis en las células del cumulus y la competencia para el desarrollo ovocitario in vitro. Los COC se obtuvieron por aspiración folicular; el medio de aspiración y lavado en el control fue TCM 199 suplementado y en los tratamientos se agregó al medio 2 mM de DMTU (tto 2mM) o 20 mM de DMTU (tto 20mM). Luego de la maduración in vitro (MIV) se determinó el porcentaje de maduración nuclear por tinción de los ovocitos denudados con Hoechst 33442 (n= 357). Luego de la fecundación in vitro (FIV) con semen fresco de fertilidad probada, los presuntos cigotos se tiñeron con Hoechst 33342 para evaluar los porcentajes de penetración espermática, monospermia, formación de pronúcleo masculino (PNM) y eficiencia de la FIV (n= 260). En las células del cumulus post MIV se realizó citometría de flujo luego de la tinción con anexina V-IP para evaluar apoptosis y viabilidad (n= 90000). Se determinaron diferencias estadísticamente significativas con p < 0,05. No se observaron efectos sobre los porcentajes de maduración nuclear. El tratamiento con DMTU aumentó significativamente la penetración espermática (de 35,06% en el control a 72,91% en el tto 2 mM y 67,81% en el tto 20 mM) sin modificar la monospermia. Si bien en los dos tratamientos la cantidad de PNM fue siempre mayor al control, los porcentajes de formación de PNM no mostraron diferencias significativas. El tto 20 mM aumentó significativamente la eficiencia de la FIV, de 22,23% en el control y 31,92% en el tto 2mM a 45,69%. En las células del cumulus de los grupos tratados, se observó un aumento significativo de la viabilidad y una disminución de la apoptosis temprana. La apoptosis tardía disminuyó en el tto 20 mM en comparación con los otros grupos experimentales. Las células del cumulus constituyeron una población útil para predecir el efecto de la DMTU sobre los ovocitos. La evaluación de la competencia ovocitaria de forma indirecta, a través de la viabilidad, apoptosis y/o calidad de las células del cumulus constituye un método no invasivo interesante. El agregado de DMTU durante la recolección y búsqueda de COC resulta útil para disminuir el daño provocado por la apoptosis mediada por especies reactivas del oxígeno en las células del cumulus y optimizar el desarrollo in vitro de ovocitos porcinos.