Dando los primeros pasos en las técnicas de ?Virtual Screening? para el reposicionamiento de drogas con actividad tripanocida

PEREIRA CA; REIGADA C; VALERA VERA EA; AVILA CC; SAYE M; MIRANDA MR

Mesa redonda; XXVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2016

Las poliaminas son compuestos policatiónicos esenciales para el crecimiento y la diferenciación celular. A diferencia de otros protozoos, Tripanosoma cruziRYPANOSOMA CRUZI es auxótrofo para poliaminas, por lo tanto la disponibilidad intracelular de las mismas depende exclusivamente de procesos de transporte desde el medio externo. Respecto a inhibidores del transporte, trabajos previos reportaron que el acetato de retinol inhibe el crecimiento de Leishmania y disminuye su concentración intracelular de poliaminas. Tomando estos datos como punto de partida, se realizó una estrategia combinada de reposicionamiento de drogas por ?virtual screening? seguido por ensayos in vitro. El objetivo fue identificar drogas capaces de inhibir el único transportador de poliaminas descripto en T. cruzi (TcPAT12) y evaluar su capacidad tripanocida. Mediante un ?screening? por similitud en una base de datos de 3,000 fármacos aprobados por la ?U S Food and Drug Administration? (FDA) y el acetato de retinol como molécula de referencia, se obtuvieron siete retinoides utilizados en medicina humana. Posteriormente se realizaron ensayos de ?molecular docking? entre TcPAT12 y los retinoides seleccionados. En base a los resultados obtenidos, la isotretinoína, un medicamento utilizado para el tratamiento del acné, fue seleccionada para continuar en estudios in vitro. La isotretionoina inhibió el transporte de poliaminas así como también los transportadores de aminoácidos de la misma familia a la que pertenece TcPAT12 (TcAAAP). Los valores de IC50 calculados se encontraron en el rango de 4.6 a 10.3 µM. La isotretinoína también mostró un fuerte efecto tripanocida sobre el estadio tripomastigote con una IC50 de 130 nM. Sin embargo su efecto fue menor sobre epimastigotes (IC50 = 30.6 µM). No se observó efecto inhibitorio sobre la actividad de transportadores no relacionados estructuralmente a TcPAT12, tampoco que la droga altere la permeabilidad de la membrana plasmática ni afecte viabilidad de células de mamíferos a las concentraciones ensayadas. Estos resultados sugieren que la isotretinoína es una droga tripanocida prometedora, por ser un inhibidor multi-diana de un grupo de transportadores de metabolitos esenciales. Además, este es un fármaco utilizado hace décadas en medicina humana, lo que reduce significativamente los requisitos para su posible aplicación en la terapia para la enfermedad de Chagas.