INVESTIGADORES
LAROCCA Maria Cecilia
congresos y reuniones científicas
Título:
Participación de AKAP350, EB1 y p150glued en el mantenimiento de la polaridad epitelial.
Autor/es:
ALMADA E; TONUCCI FM; FERRETTI AC; HIDALGO F; FAVRE C; VENA R; LAROCCA MC
Lugar:
La Plata
Reunión:
Congreso; Reunion cientifica anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2016
Institución organizadora:
SAFIS
Resumen:
Las estructuras epiteliales se caracterizan por la coordinación entre la polaridad apico-basolateral de cada célula con la de sus células vecinas, que garantiza la formación de único lumen. El mantenimiento de esta polaridad simple es asegurado por el posicionamiento del huso mitótico en dirección paralela a la luz epitelial, de modo que las células hijas permanezcan en la misma lámina, lo cual depende de los microtúbulos. Las células epiteliales MDCK, derivadas de túbulos renales, generan estructuras organotípicas (quistes) con una luz central que mimetiza la luz tubular. AKAP350 es una proteína de ?andamiaje?, que integra proteínas de señalización en el aparato de Golgi y en los centrosomas, participando en la organización del citoesqueleto de microtúbulos. Previamente demostramos que las células con disminución en la expresión de AKAP350 por RNA de interferencia (AKAP350KD) forman quistes con más de un lumen. Nos propusimos determinar el mecanismo por el cual AKAP350 participa en la formación de estructuras epiteliales con polaridad simple. Determinamos que la disminución en la expresión de AKAP350 induce una alteración en la dirección del huso mitótico respecto a la luz tubular (control (C: 82±2; AKAP350KD: 40±10). Los centrosomas constituyen los polos del huso mitótico. Estudiamos el efecto del desplazamiento de AKAP350 de centrosomas, mediante la expresión de su dominio de localización centrosomal (PACT). Los quistes formados mostraron fenotipos similares a los de AKAP350KD (C: (80±10)% simples, (20±10)% complejos; PACT: (27±5)% simples, (70±10)% complejos), indicando que la AKAP350 centrosomal es necesaria para la polaridad epitelial simple. A través de su dominio amino terminal (NTD), AKAP350 interacciona con p150glued, componente de dinactina que interacciona con la proteína de unión a los extremos (+) de microtúbulos EB1. p150glued y EB1 modulan el posicionamiento del huso mitótico. Evaluamos el fenotipo los quistes formados a partir de células que sobreexpresan AKAP350 NTD, y observamos un aumento significativo en la formación de quistes complejos (+46 %*). Asimismo, analizamos la localización centrosomal de p150glued y EB1 en condiciones que favorecen la remodelación de los microtúbulos, tal como la formación del huso mitótico, en las células AKAP350 NTD y PACT, y, en ambos grupos, la encontramos significativamente disminuida (p150glued: AKAP350 NTD -13%*; PACT -60%*; EB1: AKAP350 NTD -45%*; PACT -40%*). Concluímos que AKAP350 asegura el correcto posicionamiento del huso mitótico durante la formación de estructuras epiteliales simples, mediante el reclutamiento de EB1 y p150glued a centrosomas. *p