Análisis genético por técnica de RAPD de Streptococcus agalactiae aislados de neonatos y sus madres

LACKZESKI M; NOVOSAK M; BOBADILLA F; LIMANSKI A; VERGARA M; DELGADO O D

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016; 2016

Asociación Argentina de Microbiología- Asociación Latinoamericana de Microbiología

Streptococcus agalactiae (SGB) es la primera causa de infecciones severas invasivas en lactantes menores de tres meses. Meningitis, neumonía y sepsis son los principales cuadros en estos niños. Estas infecciones se describen como las más graves que puede sufrir un individuo en sus primeras horas de vida, siendo la principal vía de infección (95%) la transmisión materna. Diversos estudios realizados sobre SGB con fines epidemiológicos se basan en técnicas moleculares orientadas al estudio de la diversidad genética entre organismos estrechamente relacionados, entre ellas se utiliza la amplificación aleatoria de ADN polimórfico (RAPD). La técnica de RAPD ha ganado amplia aceptación. Es un método accesible y sensible basado en el uso de cebadores arbitrarios para amplificar segmentos polimórficos de ADN mediante PCR (reacción en cadena de la polimerasa). La etapa crítica en la técnica es la selección de cebadores apropiados que permitan diferenciar cepas de una especie determinada.Los objetivos de este trabajo fueron caracterizar genéticamente SGB aislados de neonatos y sus respectivas madres y, la selección de condiciones adecuadas del ensayo de RAPD.Se estudiaron 8 aislamientos de SGB parentales recuperados entre 2011-2014 y conservados en leche descremada al 20% y -80°C, 4 fueron obtenidos de hisopados vagino-rectales de madres colonizadas, portación que fue investigada después del parto y; 4 de hemocultivos de sus respectivos recién nacidos con diagnóstico de enfermedad invasiva precoz por SGB, recuperados durante las primeras 48 h de vida. Para la técnica de RAPD, se utilizaron los cebadores OPS11, OPB17 y OPB18 con la finalidad de seleccionar aquel con capacidad de discriminar entre cepas no relacionadas genéticamente. Para evaluar la utilidad de cada cebador, se utilizó la fórmula de Hunter y Gaston que establece el índice de discriminación (D), siendo necesario un D mayor a 0,90 para considerar que los aislamientos pertenecen a clones diferentes. Los perfiles de amplificación observados para los 8 aislamientos, empleando independientemente cada cebador, permitieron deducir el D, siendo D=1 para el cebador OPS11, y D=0,84 para OPB17 y OPB18. Por lo tanto, OPS11 fue seleccionado para el estudio de la relación clonal de los aislamientos parentales, encontrándose perfiles de amplificación similares por RAPD para cada par madre-hijo. A su vez, se han observado diferentes perfiles de amplificación entre los pares de cepas madre-hijo, lo que revela la discriminación entre cepas no relacionadas. Estos resultados indicaron la transmisión vertical para cada caso estudiado y la robustez del cebador OPS11 usado, para esta colección de aislamientos.Este estudio permitió encontrar condiciones apropiadas del ensayo de RAPD, lo que es de enorme utilidad para estudios epidemiológicos ligados a la portación materna y transmisión de un patógeno severo para el recién nacido, como S. agalactiae, así como a la eventual transmisión horizontal de esta bacteria.