EXPRESIÓN 3D DE CADHERINA E DURANTE EL DESARROLLO DE LA EPIDERMIS EMBRIONARIA DE DANIO RERIO

SAMPEDRO, MARIA FLORENCIA; IZAGUIRRE, MARIA FERNANDA; SIGOT, VALERIA

Taller; III Taller de Biología Celular y del Desarrollo; 2016

La epidermis embrionaria del pez cebra Danio rerio está constituida por una capa celular denominada EVL (enveloping layer), en el estadio de 16 hpf. Hacia las 24 hpf se desarrolla una segunda capa epitelial basal (EBL, epidermal basal layer), proveniente del ectodermo ventral. Ambas capas están conectadas entre sí por uniones adherentes (UAs) intercelulares. Las UAs están conformadas principalmente por cadherina E (cadh-E) y son dinámicamente reorganizadas durante las remodelaciones tisulares ocurridas durante el desarrollo animal.El objetivo de este trabajo fue estudiar el patrón de expresión de cadh-E en células epidérmicas de pez cebra, así como caracterizar la morfología celular durante el desarrollo de este tejido. Para ello se utilizaron embriones salvajes (n=12) de 16, 24, 31 y 48hpf fijados en Carnoy, se inmunmarcaron in toto con anti-E-cadh─IgG-FITC y se analizaron por microscopía de fluorescencia y deconvolución digital (MDD). Se analizó la presencia de clusters de cadherinas en base a la distribución de intensidades de fluorescencia y la variabilidad en la morfología celular.Cadh-E se inmunolocalizó predominantemente en las membranas basolaterales de las células de la EVL en un patrón segmentado a las 16hpf, incrementándose su expresión hacia las 24hpf. El nivel de expresión aumenta aún más a las 31hpf, detectándose por primera vez en las "puncta adherens", ubicadas en la intersección de 3 o 4 células. Hacia las 48hpf, la inmunomarcación finalmente se establece en un patrón continuo en el perímetro celular. En contraste, se detectó baja inmunolocalización en la EBL. Respecto a la morfología, mientras que en la EVL predominan las células de 6 lados en todos los estadios estudiados, alcanzando 40-60%, en la EBL predominan las células pentagonales, alcanzando un 60% a las 48hpf. En conclusión, los resultados preliminares evidencian diferencias en los niveles de expresión y geometría celular de ambas capas, sugiriendo un rol estabilizante de cadh-E en la EVL, en la que predominan células hexagonales, capaces de soportar las mayores fuerzas de tensión de la superficie expuesta al ambiente. La menor intensidad de fluorescencia en la capa basal sugiere el rol adhesivo predominante por parte de otro tipo molecular, durante los estadios analizados.