IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS ASOCIADAS A VESÍCULAS INTRACELULARES DE CÉLULAS MDCK

CARLOS H PAVÁN; JOSE LUIS E MONTI; LUCILA G PESCIO; NORMA B STERIN-SPEZIALE

Rosario

Congreso; III CONGRESO ARGENTINO DE ESPECTROMETRÍA DE MASAI; 2016

La espectrometría de masas es una herramienta analítica que permite la identificación de proteínas ya sea de organismos enteros, tejidos o bien compartimentos intracelulares. En este trabajo se presentan resultados preliminares sobre la identificación de proteínas asociadas a vesículas aisladas de un cultivo de células MDCK (Madin-Darby canine kidney). Brevemente, la metodología empleada consistió en lisar células MDCK, separar los microsomas por centrifugación diferencial, y realizar un inmuno-aislamiento con anticuerpo anti?IFT20 de las vesículas de interés y posterior electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de dodecil-sulfato de sodio (SDS-PAGE). Cada banda del gel (29 en el presente estudio) fue analizada por espectrometría de masas para identificar las proteínas presentes. Para ello, las proteínas fueron sometidas a reducción y alquilación de sus puentes disulfuro, digestión con tripsina, y análisis de los péptidos obtenidos por MALDI TOF/TOF. En la tabla 1 se muestran las proteínas encontradas a partir del inmuno-aislamiento de vesículas IFT20 positivas, proteína asociada al complejo de Golgi que participa en el transporte vesicular para la formación del cilio primario. Esta organela representa el estadio final de diferenciación de las células MDCK. Entre las proteínas identificadas se encuentran proteínas del retículo endoplásmico rugoso (REG), proteínas que participan del transporte vesicular desde el REG al complejo de Golgi y proteínas del citoesqueleto. Cabe destacar la Galectina-3, que se localiza en la base del cilio primario y cumple un rol fundamental en la diferenciación de las células MDCK. Este resultado sugiere que las vesículas IFT20 positivas son las que transportan la galectina 3 hacia el cilio primario. El estudio de la proteómica de las vesículas provee información valiosa que permite dilucidar la importancia de determinadas proteínas en procesos celulares esenciales, como la diferenciación de las células epiteliales. Tabla 1. Proteínas identificadas en vesículas de células MDCK.