Localizacion inmunohistoquimica de VEGF y del receptor Flk-1 en neuronas del sistema olfatorio de Bufo arenarum

JUNGBLUT LD; POZZI AG; PAZ DA

Villa Giardino, Cordoba, Argentina

Taller; VII Taller Argentino de Neurociencias; 2005

El factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) juega un importante papel en la regulación de la angiogénesis, tanto durante el desarrollo normal como en situaciones patológicas. En los últimos años han surgido estudios que demuestran la presencia del VEGFen el SNC y Periférico. Su expresión se verifica tanto en neuronas como en células gliales participando en el crecimiento, maduración y función neuronal. Además se ha descripto un efecto neuroprotector en hipoxia e hipoglucemia y un efecto antiapoptótico en neuronas de cerebro de ratón. En general la presencia de VEGF se relaciona con zonas de activo recambio neuronal tales como el hipocampo, la zona subventricular y el bulbo olfatorio. Las múltiples funciones biológicas descriptas para VEGF son principalmente mediadas por sus receptores tirosina kinasa Flt-1 y Flk-1. Los estudios más recientes indican que el receptor Flk-1 está implicado en la diferenciación neuronal y las funciones antiapoptóticas de VEGF está presente en neuronas del ganglio dorsal y cervical superior, mientras que se ha observado expresión de Flt-1 en neuronas maduras sólo en cuadros de hipoxia. El epitelio olfatorio se caracteriza por el continuo reemplazo de neuronas que mueren por nuevas, a partir de las células progenitoras (células basales del epitelio olfatorio). Esta actividad de nueva formación neuronal, diferenciación y crecimiento axonal durante el desarrollo del sistema olfatorio sugerirían un papel para VEGF. Se utilizaron larvas de B. arenarum obtenidas por fertilización in vitro. Se confirmó por inmunohistiquímica la presencia de VEGF165 y el receptor Flk-1 en neuronas del sistema olfatorio de Bufo arenarum en distintas etapas del desarrollo. Se confirmó por Western Blot la especificidad del anticuerpo. Las bandas obtenidas mostraron un peso molecular semejante al descripto para ambas proteínas de humanos. Se verificó la colocalización de VEGF con su receptor en neuronas de la mucosa olfatoria. Si bien la inmunomarca de VEGF se restringe a las neuronas maduras, Flk-1 se distribuye tanto en neuronas  maduras como en células progenitoras basales y neuronas inmaduras. La presencia de VEGF no se limitó a las neuronas olfatorias sino que sus axones, que forman el nervio olfatorio y el vomeronasal, también mostraron expresión de la proteína. Además fue evidente la inmunoma a nivel de glomérulos del bulbo olfatorio principal como también del bulbo olfatorio accesorio. Cerca de la metamorfosis se evidencia un cambio en la expresión tanto de VEGF como de Flk-1. Ambos muestran una marcada disminución: VEGF se restringe a las dendritas apicales de las neuronas presentes en el Epitelio Olfatorio mientras que la presencia del receptor es evidente en las glándulas de Bowman. Así, se demostró por primera vez la presencia de VEGF y su receptor en neuronas olfatorias durante el desarrollo en B. arenarum  y un cambio en la expresión de ambas proteínas luego de la metamorfosis. Estos resultados estarían indicando un importante papel de VEGF en procesos de diferenciación y maduración neuronal.