INVESTIGADORES
BRANHAM Maria Teresita
congresos y reuniones científicas
Título:
AMPc induce exocitosis acrosomal por la via Epac/Rap
Autor/es:
TOMES CN; BRANHAM MT
Lugar:
Mendoza, Argentina
Reunión:
Jornada; VII Jornadas de Investigación; 2005
Institución organizadora:
Facultad de Ciencias Médicas. Universidad Nacional de Cuyo
Resumen:
La reacción acrosómica (RA) es una exocitosis calcio dependiente
necesaria para la fecundación. El adenosín-3',5'-
monofosfato cíclico (AMPc) es un mediador crucial de este fenómeno.
Durante años las proteínas quinasas dependientes de AMPc
fueron sus únicos receptores intracelulares conocidos. Recientemente
se ha descripto un efector del AMPc llamado Epac, el cual
actúa como intercambiador de nucleótidos de guanina para las
proteínas Rap. Hemos desarrollado un modelo de exocitosis
acrosomal en espermatozoides permeabilizados con estreptolisina
O (SLO) que ha posibilitado abordar el estudio de los componentes
moleculares y mecanismos de transducción de señales que
participan en la RA. En espermatozoides no permeabilizados AMPc
induce la RA activando la PKA, quien a su vez abre canales de
calcio en la membrana plasmática. En espermatozoides tratados
con SLO, la exocitosis disparada por AMPc es insensible a los
inhibidores de PKA H89, péptido PKI y RpcAMPS. Así, planteamos
la posibilidad de que el blanco del AMPc fuera Epac. Aquí
demostramos la presencia de esta proteína en espermatozoides
humanos mediante ensayos de Western blot e inmunofluorescencia.
La estimulación con un análogo selectivo de Epac indujo
exocitosis en una magnitud similar a la alcanzada por el calcio.
El AMPc estimula la RA per se y no a través de la movilización
o ingreso de calcio puesto que altas concentraciones de EGTA
no atenúan el efecto. Anticuerpos específicos contra Epac bloquean
la RA, demostrando el requerimiento de esta proteína. La
introducción en espermatozoides tanto de anticuerpos anti-Rap,
como de un dominio específico de unión a esta GTPasa, previno
la exocitosis, sugiriendo la posibilidad de que la vía Epac-Rap fuera
crucial en la exocitosis acrosomal. Nuestros resultados sugieren
que la activación de la vía Epac/Rap, es suficiente para desencadenar
todos los fenómenos inherentes a la fusión