Visualización y análisis de la distribución de lipopolisacáridos en mezclas binarias de fosfolípidos

HENNING, MARÍA FLORENCIA; SANCHEZ, SUSANA; BAKÁS, LAURA

La Plata, Bs As.

Congreso; Congreso de la Sociedad Argentina de Biofísica.; 2008

Sociedad Argentina de Biofísica.

Los lipopolisacáridos (LPS) representan uno de los mayores factores de virulencia de bacterias Gram-negativas y son responsables del shock séptico. Son considerados como los principales antígenos que inducen la expresión de moléculas pro-inflamatorias durante las infecciones. El LPS, liberado durante la división  y/o muerte celular es ingerido por macrófagos y luego de la internalización, el LPS  se localiza en fagosomas, endosomas, complejo de Golgi, mitocondria, núcleo y superficie celular. En el caso de patógenos intracelulares como Brucella abortus LPS capturado por macrófagos se recicla hacia  la membrana plasmática. En este trabajo se presenta un análisis de la distribución de lipopolisacáridos marcados con isotiocianato de fluoresceína (FITC-LPS) en vesículas gigantes (GUV´s) compuestas por mezclas binarias de fosfolípidos dipalmitoil-fosfatidilcolina/dioleil-fosfatidilcolina (DPPC/DOPC) empleando microscopía de fluorescencia de dos fotones. Los dominios gel y líquido cristalino se visualizaron empleando GUV´s marcadas con 6-dodecanoil-2-dimetil-amino-naftaleno (Laurdan) y se calculó la polarización generalizada. A 50ºC, esta mezcla binaria es homogénea de acuerdo al histograma pero, a 25 ºC se visualizan dos fases diferentes. Las imágenes de fluorescencia de FITC-LPS muestran una distribución selectiva de LPS en los dominios en fase gel cuando la mezcla binaria se enfría a 25 ºC y tiene lugar la segregación de dominios gel y líquido cristalino. Por otro lado, se estudió la resistencia a la solubilización de liposomas multilamelares de DPPC/DOPC frente a detergentes como Tritón X100, encontrando que a 25°C la presencia de LPS otorga resistencia a la solubilización de estos liposomas. Los resultados sugieren que en membranas biológicas, LPS podría agregarse y concentrarse selectivamente en dominios ordenados, del tipo de los formados por colesterol, siendo este un mecanismo que concentre los componentes de la compleja maquinaria que participa en la señalización de LPS en células eucarióticas.