INVESTIGADORES
LAROCCA Maria Cecilia
congresos y reuniones científicas
Título:
Regulación de la supervivencia ante estrés nutricional en células HepG2: participación de las quinasas AMPK y PKA
Autor/es:
FERRETI AC; MATTALONI SM; TONUCCI F; LAROCCA MC; FAVRE C
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2012
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Fisiología
Resumen:
AMPK es clave en la adaptación al estrés energético. Las células
tumorales realizan glucólisis anaeróbica a alta tasa y son muy dependientes de
los niveles de glucosa, por lo que esta vía cobra un interés central. AMPK
tiene roles opuestos en la proliferación y la muerte celular: en algunos
contextos promueve apoptosis y/o arresto de la proliferación, y en otros
favorece la supervivencia. PKA y AMPK regulan algunos puntos comunes del
metabolismo. AMPK es inhibida por PKA en distintos tejidos, aunque no se han
analizado estos efectos regulatorios en el control del crecimiento tumoral.
Previamente demostramos que en hepatocitos la falta de glucosa induce apoptosis
por un mecanismo PKA dependiente. En este trabajo analizamos los cambios en la
supervivencia en células de hepatocarcinoma HepG2 ante restricción de glucosa,
así como su modulación por AMPK y PKA y evaluamos la posible interacción entre
ambas vías en la muerte/proliferación durante este estrés energético. Células
HepG2 fueron incubadas en presencia (C) y ausencia de glucosa (Glc0) con o sin
el activador de AMPK AICAR y con o sin el activador de PKA dbAMPc. En primer
lugar se evaluó la viabilidad celular mediante el ensayo de MTT a distintos
tiempos. La falta de glucosa indujo una disminución significativa de la
viabilidad a partir de las 12 h que se mantuvo hasta las 36 h (C a t=0: 100 %;
Glc0 a t=36 h: 125,3±7,0 %* vs C a t=36 h: 196,7±6,5 %). AICAR produjo pérdida
significativa de la viabilidad a partir de las 36 h y potenció significativamente
la disminución de la viabilidad durante la ausencia de glucosa a este tiempo
(AICAR glc0: 93,2±3,8 %* vs Glc0 t= 36 h). Por otro lado, la activación de PKA
no tuvo efecto sobre el número total de células viables. En segundo lugar, se
determinó si la pérdida de viabilidad en cada caso se debía a muerte apoptótica
y/o arresto de la proliferación. Para ello se analizó por citometría la
población de células apoptóticas con Annexin V-FITC y se cuantificó la
expresión de citocromo c en citosol y de los inhibidores del ciclo celular p53
y p21. La expresión de citocromo c aumentó significativamente en todos los
grupos, siendo el máximo aumento en AICAR glc0: 426,4±69,5 %* y dbAMPc AICAR
glc0: 428,4±166,4 %* vs C: 100 %. Los niveles de p53 y p21 tendieron a aumentar
ante la falta de glucosa, mientras que sólo existió un aumento significativo
ante la activación de AMPK con AICAR o de PKA con dbAMPc, observándose que la
combinación de ambos previno estos aumentos en presencia o ausencia de
glucosa, registrándose valores de p21 de 197,3±74,2 %*; 164,7±30,4 %*;
104,6±28,1 % y 69±12,3 % vs C: 100 %, para AICAR, AICAR glc0, dbAMPc AICAR y
dbAMPc AICAR glc0, respectivamente. Los resultados indican que la falta de
glucosa en HepG2 involucra distintas vías de quinasas que regulan
diferencialmente la muerte y la proliferación y que existiría una
interregulación entre AMPK y PKA controlando la expresión de proteínas claves
para el arresto del ciclo celular.*p<0,05