Distribución del receptor de Acetilcolina Nicotínico en microdominios lipídicos de células CHO-K1/A5 y CHO-K1/GM2.

VICENTE BERMÚDEZ; M. V. PICARDI; IDI BONINI; FRANCISCO JOSE BARRANTES

Mar del Plata

Congreso; Congreso conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

Sociedad Argentina de Neuroquímica, Sociedad Argentina de Biofísica, Sociedad Argentina de Fisiología, Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Sociedad Argentina de Inmunología, Asociación Argentina de Farmacología Experimental,SAB

Hemos estudiado la distribución del receptor de acetilcolina nicotínico (AChR) en microdominios lipídicos («balsas» o «rafts»), y en particular la participación de gangliósidos en tales plataformas. Utilizamos para tal fin dos líneas celulares generadas en el laboratorio: CHO-K1/A5 y CHO-K1/GM2. La primera de éstas expresa heterólogamente el AChR de tipo muscular murino adulto y carece de la capacidad de sintetizar el gangliósido GM2 -por ende no puede producir GM1, postulado como lípido residente de microdominios. La segunda es una línea creada en nuestro laboratorio por transfección estable de la CHO-K1/A5 con la GM3:N-acetilgalactosaminil transferasa (GM2 sintasa), rescatando así la producción de GM2 y GM1. Se estudió la distribución del AChR en gradientes de sacarosa tras la solubilización de las dos líneas celulares en Triton X-100. El AChR proveniente de células CHO-K1/A5 se localizó exclusivamente en las fracciones de mayor densidad, mientras que en el caso de células CHOK1/GM2 se observó su presencia también en fracciones más livianas. Se observaron, además, diferencias en el perfil lipídico de las fracciones subcelulares de ambos tipos celulares. El contenido de colestero (col) es mayor en las fracciones medias, características de las balsas, en el caso de CHO-K1/GM2. La relación fosfolípido/Col fue mayor en las fracciones pesadas de los gradientes de CHO-K1/A5 y en las medias de CHO-K1/GM2. La incubación de las células CHO-K1/GM2 con toxina colérica, ligando de GM1, resultó en el desplazamiento del AChR a las fracciones livianas del gradiente. La localización diferente del AChR en los microdominios de los dos tipos celulares podría atribuirse a la presencia de gangliósidos.