Efectos in vitro del acetato de leuprolide, análogo de GNnRH, en la proliferación de células de cuerpo lúteo bovino

HAMER, CS.; SOÑEZ, MC.; GERMANO, P.; GAMBAROTTA, MC.; LOMBARDO, DM.

Buenos Aires

Jornada; Terceras Jornadas de Jóvenes Investigadores en Ciencias Veterinarias 2013; 2013

Subsecretaría de Ciencia y Técnica. Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA.

GnRH es una molécula ovárica endógena moduladora del desarrollo folicular y probablemente de la formación del cuerpo lúteo en bovinos. Se ha demostrado su papel regulador del proceso apoptótico sobre las células granulosas de esta especie pero su participación sobre la proliferación celular ha sido parcialmente estudiada. El objetivo del trabajo fue determinar los efectos in vitro del acetato de leuprolide (AL, análogo de GnRH) en la proliferación de células de cuerpo lúteo bovino (CLB) en dosis de 10 y 100 nM durante 24 y 48 hs. Células de CLB de animales de faena se cultivaron durante 7 días con DMEM + F12 suplementado. Se realizaron tres experimentos con los siguientes tratamientos, por triplicado en cada uno: SFB 5% (control), AL 10nM y AL 100 nM. Luego de las 24 o 48 hs de estimulación se fijaron las células con Bouin, 15 min. Las células en proliferación se identificaron empleando método inmunocitoquímico indirecto LSAB (Dako) aplicando anticuerpo monoclonal anti-humano Ki-67 Clone MIB-1 (Dako) 1:100, con controles negativos omitiendo la incubación con el anticuerpo primario y cortes de amígdala humana como controles positivos. El complejo Ag-Ac se reveló con DAB 0,003% (Dako), finalizando con leve contrastación con hematoxilina de Mayer, deshidratación y montaje. Se realizó la captura de 1535/1260 imágenes para 24 y 48 hs respectivamente, mediante XnView y el recuento de células totales, Ki67 positivas y negativas. Los datos obtenidos se analizaron estadísticamente mediante InfoStat y ANOVA paramétrica (p