Interacción entre AIA y biofilm durante la formación de biofilm en Azospirillum brasilense.

SALCEDO FLORENCIA; LAMATTINA LORENZO; CREUS CECILIA

Buenos Aires

Congreso; II Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2015

Asociación Argentina de Micobiología

Azospirillum brasilense pertenece al grupo de bacterias promotoras del crecimiento vegetal y es capaz de asociarse a las raíces de vegetales de importancia agronómica. Para lograr la efectiva colonización de la raíz es necesaria la formación de un biofilm bacteriano estable. Varios factores tanto endógenos como exógenos afectan la formación del biofilm y la colonización de las raíces. Entre los primeros, la producción por la bacteria de moléculas reguladoras como el Ácido-Indol-Acético (AIA) y el Óxido Nítrico (NO) podrían afectar la formación de este tipo de estructuras. Evidencias obtenida previamente indican que el NO regula la formación de agregados y de biofilm en A. brasilense en sistemas in vitro, pero aún se desconoce si el AIA participa en estos procesos. Entre los factores exógenos la presencia de sal en el medio afecta la capacidad de agregación bacteriana, por lo que resulta interesante evaluar el efecto de la salinidad sobre la formación de biofilm en esta bacteria. El objetivo del trabajo fue estudiar si el AIA y el NO están involucrados en la regulación de la formación de biofilm de A. brasilense Sp245 en condiciones de estrés salino. Se utilizó A. brasilense Sp245 y sus mutantes isogénicas Faj164 (mutante napA, nitrato reductasa periplasmica negativa) deficiente en la producción de NO y Faj009 (mutante ipdC, piruvato decarboxilasa negativa) deficiente en la síntesis de AIA. Las cepas fueron crecidas en NFb-NO3- triptófano100µM, con o sin 300mM NaCl, de forma estática en placas de 96 wells, durante 2 y 5 días a 32°C. Se determinó el crecimiento total espectrofotométricamente y la formación de biofilm con cristal violeta. La producción de AIA fue estimada por el método Salkowsky y la concentración de nitritos (forma indirecta de estimar la producción de NO) fue analizada usando un microelectrodo específico. Los resultados mostraron que Sp245 y Faj009 presentaron mayor formación de biofilm que Faj164 a los dos días. A este tiempo, tanto el biofilm de Sp245 como de Faj009 produjo nitritos, y bajos niveles de excreción de AIA. Por el contrario, en Faj164 no se detectó producción de nitritos y sí se observó un aumento en los niveles de AIA. A los 5 días todas las cepas aumentaron el biofilm, la producción de nitritos no se modificó en Sp245 y Faj009, mientras que en Faj164 se incrementó alcanzando los valores de la cepa salvaje. No se observaron diferencias entre las cepas en los niveles de AIA a los 5 días. Por otra parte, 2 días en condiciones de estrés salino provocó que todas las cepas formaran mayor cantidad de biofilm respecto de su control sin sal. Los resultados sugieren una interacción entre el AIA y el NO durante la formación de biofilm de Azospirillum.