Improvement of bovine semen quality by removal of membrane-damaged sperm cells with DNA aptamers and magnetic nanoparticles.

FARINI VERÓNICA L; CAMAÑO CARLA; YBARRA GABRIEL; VIALE DL; VICHERA GABRIEL; YAKISICH JS; RADRIZZANI MARTIN

Buenos aires

Congreso; Nano 2016: ?XVI Encuentro de Superficies y Materiales Nanoestructurados?; 2016

Departamento de Física de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

En el ganado Bovino la criopreservación de semen y semen sexado puede matar hasta el 50 % de espermatozoides y disminuye el éxito de la inseminación asistida (AI). Por lo tanto, es importante mejorar la calidad del semen antes de la IA. En este trabajo se utilizó la técnica de Cell-SELEX(1) para seleccionar aptámeros de una sola hebra de ADN capaces de reconocer con alta afinidad y especificidad las membranas plasmáticas dañadas de los espermatozoides. De la selección, aislamos aptámeros con dos motivos conservados de 6 nucleótidos de longitud cada uno y que se unen a la membrana de los espermatozoides tratados. Luego, utilizamos los aptámeros de ADN sintético conjugados con biotina para separar células viables mediante nanopartículas. Las nanoparticulas de óxido de hierro superparamagnético (SPION) fueron sintetizadas por la técnica de Stober(2) modificada, La nanoparticulas de hierro fueron englobadas con tetraetil ortosilicato (TEOS) y recubiertas con 3- aminopropil-trietoxisilano (APTES) para conjugar la Avidina en su superficie. Las nanoparticulas de 130 nm fueron utilizadas para separar los espermatozoides sanos de aquellos dañados. Este procedimiento mejoró la calidad del semen, incrementando significativamente el porcentaje de espermatozoides sanos sin afectar a la tasa de clivaje de blastocistos producido por fertilización in vitro.REFERENCIAS1.- Sefah, K., Shangguan, D., Xiong, X., O'Donoghue, M. B., Tan, W., 2010. Development of DNA aptamers using Cell-SELEX. Nat. Protoc. 5, 1169-85.2.- Stöber, W., Fink, A., Bohn, E., 1968. Controlled growth of monodisperse silica spheres in the micron size range. J. Colloid. Interface Sci. 26, 62-9.