Análisis del gen de clase 2 del MHC bovino, DRB3 exón 2, por PCR-RFLP en animales positivos y negativos al virus de leucemia bovina.

PANEI C.J.; ECHEVERRÍA M. G.; DÍAZ S.; GIOVAMBATTISTA G.; METZ, G. E.; SERENA M. S.; GONZÁLEZ E. T.

Valle Hermoso, Córdoba

Conferencia; XVII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2007

Sociedad Argentina de Virología

La Leucosis Enzoótica Bovina es una enfermedad crónica causada por el virus VLB, perteneciente a la familia Retroviridae, que se integra como provirus al genoma de los linfocitos B. Aproximadamente un 30% de los bovinos infectados desarrollan linfocitosis persistente –LP- (un estadío considerado pretumoral por algunos autores), 0,1 a 5% pueden desarrollar tumores que llevan invariablemente a la muerte, mientras que en un 65% - 70% de los casos permanece en forma asintomática, en un estado seropositivo y aleucémico. Varios factores del hospedador pueden interrelacionarse e influenciar la prevalencia de infección y/o enfermedad en un plantel en particular con desarrollo de LP y/o linfosarcoma. Esta susceptibilidad estaría asociada a factores genéticos, especialmente relacionados a los genes que codifican los antígenos del Complejo Principal de Histocompatibilidad bovino (BoLA) por la presencia de haplotipos que condicionarían la resistencia o susceptibilidad a la enfermedad. El Complejo Mayor de Histocompatibilidad bovino juega un rol significante en la respuesta inmune; está localizado en el cromosoma 23 y se puede dividir en genes de clase I y clase II. Estos ya han sido asociados con la incidencia de infecciones con VLB como también con otras enfermedades tales como mastitis, carga parasitaria, entre otras. Los genes de clase II codifican para proteínas que presentan péptidos previamente procesados, derivados de antígenos extracelulares para las células CD4. Las cadenas alfa1 y beta1 presentan el sitio de unión a estos antígenos. El gen con mayor polimorfismo es el DRB3 exón 2.En este trabajo se analizaron un total de 40 animales provenientes de un tambo de la Provincia de Bs. As. a los cuales se aplicó análisis serológico (ELISA) y PCR (nested PCR para un segmento del gen env), recuento de linfocitos de sangre periférica y fueron clasificados como: 10 animales positivos y con tumor (cat. I), 10 animales positivos y con LP (más de 12.000 linfocitos/ml -cat. II-), 10 animales positivos sin linfocitosis (cat III) y por último 10 animales negativos para leucosis bovina (cat. IV). El DNA genómico total se extrajo a partir de sangre entera mediante kits comerciales (Promega). Para amplificar el exón 2 del gen DRB3 se realizo PCR “heminested” con los primers HL030 y HL031 y una segunda ronda de amplificación con los primers HL030 y HL032. Los amplicones obtenidos se digirieron, en base a información disponible, con las enzimas de restricción Rsa I (37ºC 1-2 hs), Bsty I (50ºC 1-2 hs) y Hae III (37ºC 1-2 hs) a fin de definir el genotipo de cada animal para el DRB3.2. Los productos de digestión se sembraron en geles de poliacrilamida al 6% y se visualizaron luego de la tinción con bromuro de etidio.Los resultados que se obtuvieron permiten señalar lo siguiente: se observó la presencia de los alelos DRB3.2, *8, *10, *16, *24, *28, *36 para los animales positivos a BLV y con tumor, los alelos DRB3.2 *8, *10, *16, *24, *40, *43, *51 para los animales positivos con LP, los alelos DRB3.2 *6, *8, *15, 23, *40 para los animales positivos y conteo linfocítico normal y los alelos DRB3.2 *15, *16, *23, *24, *41 para los animales negativos.